包被原的性质很重要【yào】，蛋白【bái】浓度，是【shì】否降解，这关系到你【nǐ】做出的抗体可不【bú】可以被其识别，所【suǒ】以保留【liú】抗【kàng】原很重要，ELISA试剂盒【hé】做重组蛋白【bái】时一定要【yào】在【zài】冰浴下【xià】缓慢融化就是【shì】这个道理【lǐ】。让大【dà】量不相关的蛋【dàn】白质【zhì】充填这些旷地空闲，从【cóng】而排斥ELISA后的步【bù】骤中干扰【rǎo】物质的再吸附。但有时因为试验的【de】需要，包【bāo】被原的【de】特殊【shū】性也可能采用中性的缓冲溶液来包。

    常用【yòng】封【fēng】剂有【yǒu】：0.05%-0.5%的【de】BSA；10%的小牛【niú】血清或【huò】1%明胶；脱脂奶粉，比较价【jià】廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还【hái】有一些稀有用到【dào】的各种【zhǒng】动物血清（主要【yào】为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等【děng】等。详细的【de】试验还要有坚固【gù】的理论外也要【yào】实践【jiàn】，看一下可不可以【yǐ】应用到自己试验当【dāng】中去。但选用什么，要依据试验详细来【lái】实践。

应留意以下原理：

ELISA试剂盒【hé】因为蛋白质与聚苯乙烯【xī】固【gù】相载体是【shì】通过物【wù】理吸附【fù】结合的，靠的【de】是蛋白质分【fèn】子结构上的疏水基团与【yǔ】固相载体表面的疏水基【jī】团间【jiān】的作用，这种物理吸附【fù】长短特【tè】异性的，受蛋白质的分【fèn】子量、等电点【diǎn】、浓度等【děng】的影响，大分子蛋白质较小分【fèn】子蛋白质通常含有更【gèng】多的疏水基团，故更【gèng】易吸【xī】附【fù】到固相载体表面。小分【fèn】子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才【cái】能【néng】固定在【zài】固相载体上。还有有的【de】包被原可能不是蛋白【bái】，对于生【shēng】物素【sù】和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造【zào】再【zài】加以包【bāo】被【bèi】，亲和素生【shēng】物素:先亲和素【sù】先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包【bāo】被方法平【píng】均、牢【láo】固，已扩大应用于各种【zhǒng】抗原物质【zhì】的定量测定。常用【yòng】的包被液除了刚【gāng】才提到的pH9.6碳酸盐缓冲【chōng】液，还有【yǒu】pH7.2的【de】磷酸盐缓冲【chōng】液【yè】和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

    我们在使用ELISA试剂盒96孔板的【de】实验【yàn】测定的时候，常发现有“边缘效应【yīng】"，也就是外周孔显色较中心孔【kǒng】深【shēn】。经【jīng】研究证【zhèng】实在温育中的热力学梯度可能是【shì】根本【běn】原因之所。聚苯【běn】乙【yǐ】烯本身【shēn】为【wéi】不【bú】良热导体，在实验室的常规【guī】ELISA测定中，将板从室【shì】温（通常【cháng】在25℃左右）置于37℃温【wēn】箱，板也升温时，在外【wài】周孔【kǒng】与中心孔之间【jiān】可能存在一【yī】热【rè】力【lì】学梯度。因此使用【yòng】水浴或在将反应【yīng】溶液加入至【zhì】板孔中时，将板【bǎn】和溶液均加【jiā】热至【zhì】温育【yù】温度（如37℃），就可以很容易地排除【chú】“边缘效【xiào】应"，并且可提高测定的重复【fù】性。 
    还有就是在实验中，必然有【yǒu】使用微量加样器加入样本的步【bù】骤【zhòu】。提【tí】醒注意：加样不可【kě】太快【kuài】，要避免加在【zài】孔壁上部【bù】，不可【kě】溅出和产【chǎn】生气泡。ELISA试剂【jì】盒太快的【de】话无法保证微量加样的准确性【xìng】和均一性【xìng】。加在【zài】孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会【huì】对邻近孔产生污【wū】染。出【chū】现气【qì】泡则反应【yīng】液界【jiè】面有差异。所以，有时候一份标本用相【xiàng】同的试剂盒【hé】这次测定为阳性，下次测定为【wéi】阴性，往往就是上述【shù】加样【yàng】及试剂的【de】错误所致【zhì】。