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按照ELISA试剂盒说明书要求用途
更【gèng】新时间:2024-9-21   点【diǎn】击次数:1348次

 

ELISA试剂盒检测试剂【jì】每次【cì】试验、每【měi】块扳上都要【yào】设置以下3项【xiàng】对照和用途:
1.空白对照:仅用【yòng】稀释液【yè】代替【tì】检测【cè】样本、ELISA试剂盒用来观察zui终反应【yīng】的显色“本底"、ELISA试剂盒并用于酶标【biāo】仪消除、扣除【chú】“本底",也就是说:以【yǐ】本底为【wéi】“零【líng】"读【dú】取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光【guāng】值(A);或者,在计算阴性【xìng】对照均【jun1】值(NCx)、阳性对【duì】照【zhào】均值(PCx)、样本读数的S/C.O.值时减去【qù】空白对照的本底【dǐ】吸光值。早期的酶标仪【yí】没有自动扣【kòu】除空【kōng】白对照【zhào】孔读数的功【gōng】能,ELISA试剂盒【hé】这种酶标仪现在已经被【bèi】淘汰了,写上这段话的目的是补充说【shuō】明设置空白对照【zhào】的用途。空白孔具体如【rú】何读【dú】取读数,应该按照说明书【shū】操作。
2.阴性对照:

     (1)阴【yīn】性对照的【de】含义与要求:ELISA试【shì】剂盒所谓阴性对照,是本次检【jiǎn】测试验中采用与待检测物【wù】(样品、人用试剂【jì】就【jiù】是人的血清等)具【jù】有同源性和同【tóng】质【zhì】性【xìng】,又不含有待检【jiǎn】物质,并且能够客观比较和鉴别处理因素(血清免疫【yì】学试【shì】验中【zhōng】有特【tè】异性抗原与抗体反应)之间的差异。因此【cǐ】,用动【dòng】物血清或其【qí】制品【pǐn】代替阴【yīn】性人血【xuè】清作为对照品,无论是【shì】从理论还是实践上都是【shì】不可取的。注意:据我【wǒ】所知,国【guó】产ELISA试剂盒中,有【yǒu】的【de】厂【chǎng】家是用动物血清制品稀释配置或与【yǔ】部【bù】分人血清【qīng】混合配置的;阴性对【duì】照读数,并不是“越低越好"。NCx值【zhí】接【jiē】近【jìn】0.00X水平,这是假象【xiàng】!试想【xiǎng】一下,真正采用【yòng】“阴性人【rén】血清"的阴性对照【zhào】品,NCx值会如此【cǐ】之低吗?例如,雅培乙肝【gān】六【liù】项ELISA试剂【jì】盒的NCx值,分别为:0.010(HBsAg)、0.027(抗—HBs)、0.035(HBeAg)、1.083(抗—HBe)、1.065(抗—HBc)、0.045(抗【kàng】HBc-IgM)。生物梅【méi】里埃【āi】的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合【hé】理的一个很简单的方法,只【zhī】要对比大量阴性样本的实际读数【shù】就【jiù】“一目了然"啦!
(2)阴性对照分为两类

     一【yī】是受检【jiǎn】人血清中【zhōng】并不含有或方法学灵【líng】敏度未能检出的待检【jiǎn】物的基准【zhǔn】水平,并且【qiě】结果判断值(Cut off)计算【suàn】式【shì】中决定“是"(阳性)、或“否"(阴性)的*可【kě】变值。阴性对照值【zhí】高【gāo】,导致假阴【yīn】性;反之,ELISA试剂【jì】盒导致【zhì】假阳性。二【èr】是阴性对照【zhào】设置,在方【fāng】法学上要【yào】求加入【rù】指【zhǐ】示性【xìng】定量标准品,ELISA试剂盒如中和剂【jì】HBeAg,定量HBcAg等,用以检测抗—HBe、抗—HBc。或者,选取代表平均水平的正常人血【xuè】清【qīng】用作阴性对照,ELISA试【shì】剂盒如检测抗—HBc IgM。此类【lèi】Cut off 值计算时,多数均包括阴【yīn】性和阳性对照值2个可【kě】变值。

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