我们在【zài】做一项【xiàng】实验【yàn】的时候【hòu】，需要了解的步【bù】骤与所【suǒ】需物品是*的。而【ér】今天，上【shàng】海酶【méi】联这里【lǐ】要给朋友们分【fèn】享的【de】就是实【shí】验制得细胞【bāo】的样本【běn】，您需做【zuò】好下文中的这【zhè】六步两注意。所谓的【de】六步两注意也就是操作的六个步骤【zhòu】，和两条注意事项，下面我们就来详细的看看吧。

实验之【zhī】前，我公司的【de】技术【shù】人员为朋【péng】友们特别准备说【shuō】明了所需的物品有哪【nǎ】些：
1、培养基；不含酚红的DMEM培养基
2、处理玻片：将多聚赖氨【ān】酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl缓冲【chōng】液中），涂布【bù】于玻【bō】片上，干燥【zào】后即可使用【yòng】。或者APES 2ml溶于100ml丙酮中，将玻片浸【jìn】泡入内，取出晾干，180℃干燥【zào】备用。
3、洗涤液；0.1M，pH7.2～7.4PBS
4、细胞固定液：4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含【hán】有1/1000 DEPC。
5、乙醇：70%  90%  100%
6、胃蛋白酶溶液：用0.1N HCl将其稀【xī】释为【wéi】100μg/ml
7、设备：烤箱，CO2培养箱【xiāng】，倒置显微镜，玻璃载玻片，原位杂交【jiāo】盖玻【bō】片，温箱，加【jiā】样【yàng】器和吸头等。
操作步骤：
1、在37℃ 5% CO2条件下将细胞加【jiā】在处理的【de】载玻片上，用培养基培养，时间【jiān】通过预【yù】实验确定【dìng】；
2、细胞长好后，用洗涤【dí】液洗2分钟【zhōng】×3次，室温下【xià】将其放入细胞【bāo】固定液中【zhōng】固定30-60min，蒸馏【liú】水洗涤；
3、室温下用洗【xǐ】涤液【yè】充分洗涤固定细胞，（干燥后-20℃冰冻【dòng】保存2周【zhōu】以上）
4、杂【zá】交前将固定的细胞【bāo】进行如下处理；依次【cì】在70%，90%，100%的乙【yǐ】醇中浸泡，脱【tuō】水【shuǐ】每次5min，用二甲苯【běn】洗【xǐ】涤，除去残留脂质依【yī】次在100%，90%，70%乙醇中浸【jìn】泡，进【jìn】行再水化，每次5min，zui后浸泡于洗涤液中；
5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min处理【lǐ】固定的【de】细【xì】胞，以增加细胞对【duì】大分子试剂的通透性，再【zài】用【yòng】洗涤液洗5min；
6、用1%甲醛固定10min，用洗涤液洗净。
注意！
    1、所有溶液都必须用【yòng】RNA酶抑制【zhì】剂【jì】处理。
    2、操作中重要的是及时【shí】固定，并在固定【dìng】液中加入0.1%的DEPC处【chù】理，以【yǐ】抑制RNA酶【méi】对mRNA的分解作用。此外，过【guò】度固【gù】定对原位杂交【jiāo】有明显的不利【lì】影【yǐng】响。