Elisa试剂盒以灵敏度较【jiào】高、特异性较好【hǎo】的特点在上得【dé】到了广泛【fàn】的应用【yòng】，然而实验【yàn】新手们【men】面【miàn】对各种各样、动【dòng】则上上千种的Elisa试剂盒，内心应该是崩溃的。

Elisa试剂盒的操作

(一)检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所【suǒ】需用量酶标板【bǎn】条，设空白对照1孔、阴【yīn】性【xìng】/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密【mì】封，2～8℃保存【cún】。

3.空白对照孔【kǒng】加样【yàng】品稀释液【yè】100μl；阴【yīn】、阳性对照孔分【fèn】别【bié】加【jiā】入阴、阳【yáng】性对照100μl；样品【pǐn】孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内【nèi】液体，每孔加满洗涤液【yè】，静置30秒后弃【qì】去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依【yī】次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避【bì】光【guāng】反应10分【fèn】钟。

9.每孔加终止液【yè】50μl，混匀，用空【kōng】白孔【kǒng】调零，于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

(二)样品准备

1.取动【dòng】物【wù】全血按常规方【fāng】法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无【wú】污【wū】染。样品1周内可于2～8℃保【bǎo】存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤【dí】液【yè】使用前应【yīng】恢复至室【shì】温使沉淀溶解，然后用【yòng】蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

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