本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试【shì】剂盒用【yòng】于体外定量检【jiǎn】测血【xuè】清【qīng】、血浆、组织匀浆及相关液体样【yàng】本中大鼠8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量【liàng】正常标本检验，标【biāo】本【běn】的正常浓度值均【jun1】在试【shì】剂盒【hé】提供的检测范【fàn】围内，实【shí】验过程中直接取50μL样本【běn】上【shàng】样即可。当有部分样本值超过标准【zhǔn】品浓度时，可用【yòng】样本【běn】稀释液将标本进【jìn】行适当稀释【shì】后再进行实验。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从【cóng】冰【bīng】箱中取出【chū】的浓缩【suō】洗【xǐ】涤液可【kě】能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均【jun1】匀，待结【jié】晶溶解后再配置洗【xǐ】涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏【liú】水或去离子水【shuǐ】稀释【shì】配置成400ml工作【zuò】浓度【dù】的洗涤【dí】液，未用完【wán】的放回4℃

3. 20×洗【xǐ】涤缓冲液的【de】稀释【shì】：蒸【zhēng】馏水按1：20稀释，即【jí】1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大【dà】鼠8异【yì】前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)捕【bǔ】获【huò】抗体的包被【bèi】微孔中，依次加入标本、标准品【pǐn】、HRP标【biāo】记【jì】的【de】检测抗体，经过温育洗涤。用底物TMB显色【sè】，TMB在过氧化物酶的催【cuī】化下转化成蓝色，并在酸的作用下【xià】转化成【chéng】黄色。颜色【sè】的深浅【qiǎn】和样【yàng】品中的【de】大鼠8异前列【liè】腺素【sù】F2α(8-iso-PGF2α)呈正相关。用酶标仪在450nm 波【bō】长下测定【dìng】吸光度（OD 值），计算【suàn】样品浓度【dù】。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时【shí】或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟【zhōng】，取上清【qīng】即可，或将上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存【cún】，但应避免反复冻【dòng】融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗【kàng】凝剂采【cǎi】集标本，并将标本在采【cǎi】集后的30分【fèn】钟内于9-21℃ 1000×g离心【xīn】15分钟，取上清即可【kě】检测，或将上清置于【yú】-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融【róng】。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲【chōng】洗组织，去除残【cán】留血液（匀浆【jiāng】中裂解的红【hóng】细胞会影响测量结【jié】果），称重后将组织剪碎。将剪碎【suì】的组织【zhī】与【yǔ】对应体积的PBS（一【yī】般【bān】按1:9的重量体【tǐ】积比，比如1g的组织样品对应【yīng】9mL的【de】PBS，具【jù】体体积可【kě】根【gēn】据【jù】实验【yàn】需要适当调整，并做好记录。推荐【jiàn】在PBS中加入蛋白酶抑【yì】制剂）加入玻【bō】璃【lí】匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一【yī】步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超【chāo】声破【pò】碎，或反复冻融【róng】。将匀浆液【yè】于5000×g离心5~10分【fèn】钟【zhōng】，取上清检【jiǎn】测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测【cè】，或将【jiāng】上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融【róng】。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内进【jìn】行检测的可保存于4℃，若不【bú】能及时检测，请按一次使用量分装，冻存【cún】于【yú】-20℃（1个【gè】月内【nèi】检测【cè】），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本【běn】溶血【xuè】会影响检测结果，因【yīn】此溶血标本不【bú】宜进行此项检测【cè】。

注意事项：

1. 严格按照规定的时【shí】间和温度进【jìn】行【háng】温【wēn】育以保证准确结果。所有试剂【jì】都必须在使【shǐ】用前【qián】达到室【shì】温9-21℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不【bú】正确可以导致不【bú】准确的结【jié】果。在【zài】加入【rù】底物前确【què】保尽量吸干孔【kǒng】内【nèi】液体。温育【yù】过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任【rèn】何反应试剂不【bú】能【néng】接【jiē】触【chù】漂白【bái】溶剂或漂白【bái】溶剂所散发的强烈气【qì】体。任何漂白【bái】成分都会破【pò】坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能【néng】传【chuán】播疾病，所有的样品都应管理好，按照规【guī】定【dìng】的程序处理样品【pǐn】和检【jiǎn】测装【zhuāng】置。

操作步骤：

1．从【cóng】室温平衡60min后【hòu】的铝箔【bó】袋中取出【chū】所需板条，剩余板条用自【zì】封袋密封放回【huí】4℃。

2．设置标【biāo】准品【pǐn】孔和【hé】样【yàng】本【běn】孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空白孔【kǒng】外【wài】，标【biāo】准品孔【kǒng】和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测【cè】抗体100μL，用封板【bǎn】膜封住反应孔，37℃水浴【yù】锅或恒温箱温育60min。

5．弃【qì】去【qù】液体，吸水纸上拍干，每孔加满【mǎn】洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗【xǐ】涤液，吸水纸上【shàng】拍干【gàn】，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板【bǎn】）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每【měi】孔加入终止液50μL，15min内【nèi】，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工【gōng】作表中，以标准品浓度作横【héng】坐标，对应【yīng】OD值【zhí】作纵坐标，绘制出标准品线性回【huí】归【guī】曲线，按曲线方程计【jì】算【suàn】各样本浓度值。

（此图仅供参考）

性能：
1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避免【miǎn】交叉【chā】感【gǎn】染，配【pèi】置不同浓度标准【zhǔn】品、上样【yàng】、加不同试剂都需要【yào】更换枪头。另外不同试【shì】剂请分别使用不同【tóng】的移液槽。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混【hún】合后的显【xiǎn】色底物在上板【bǎn】前应为无色，请【qǐng】避光【guāng】保存；假如微孔板后，将由物色【sè】变成不同深度【dù】的【de】蓝色。

5. 终止液【yè】上板顺【shùn】序应同显【xiǎn】色底物上板顺序一致；加入【rù】终止液后，孔【kǒng】内颜色由蓝变黄；若【ruò】孔【kǒng】内有【yǒu】绿色，则【zé】表明孔内液体未【wèi】混匀；请充分混合。

说明：

1. 由【yóu】于现有条件【jiàn】及科学技术水平尚不能对所【suǒ】有供货商提供的所【suǒ】有原料进行全面的鉴定与分析【xī】，本【běn】产品可能【néng】存【cún】在一定的【de】质【zhì】量技术风险【xiǎn】。

2. 实验结果与试剂的有【yǒu】效性、实验【yàn】者的相关操作以及【jí】当【dāng】时【shí】的实【shí】验【yàn】环境密切相关，请务必准备充足的标本【běn】备份【fèn】。

3. 不同批次的【de】同【tóng】一产品可能会有少许差别【bié】，如：检测限、灵敏度以【yǐ】及显色时间等，请依据试剂盒内【nèi】说【shuō】明【míng】书进【jìn】行实验操【cāo】作，网站电子版说明书【shū】仅【jǐn】作参考。

4. 只有全部【bù】使用本试【shì】剂盒配【pèi】套试剂才【cái】能保证检测效果，不能【néng】混用其他【tā】制造【zào】商的产品。只【zhī】有严【yán】格遵守本试剂盒【hé】的实验【yàn】说明才会得到检测结果。