本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体外定量检测血清【qīng】、血浆【jiāng】、组织匀浆及相【xiàng】关【guān】液体样本【běn】中大鼠【shǔ】N-甲基-D-天氡氨酸离子能受体2A(GRIN2A)的含量。

有效期：6个月

保存条件：9-21℃

试剂盒组成：

备注：

1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 经过大量正常【cháng】标【biāo】本【běn】检验，标本【běn】的正常浓度【dù】值【zhí】均在试剂盒提供的检测【cè】范围内，实【shí】验过程中直接取50μL样本上【shàng】样【yàng】即可。当有部分样本值超过标【biāo】准品浓度时，可用样本稀释【shì】液将标本【běn】进行适当【dāng】稀释后再进行【háng】实验【yàn】。

检测前准备工作：

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 从冰箱中取出【chū】的浓缩洗涤液可【kě】能有结晶【jīng】，属【shǔ】于正常现象；放【fàng】置室温，轻摇均匀，待结晶溶【róng】解【jiě】后再配【pèi】置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤【dí】液用蒸馏水【shuǐ】或去离子水稀释配置成【chéng】400ml工作浓度【dù】的【de】洗涤液【yè】，未用完的放回4℃

3. 20×洗涤缓冲【chōng】液【yè】的【de】稀释：蒸馏水按1：20稀【xī】释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏【liú】水。

实验原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被【bèi】大鼠N-甲基-D-天氡氨酸离子能受体【tǐ】2A(GRIN2A)捕获【huò】抗体的包被微【wēi】孔【kǒng】中，依【yī】次加入【rù】标本、标【biāo】准品、HRP标记的检测抗体，经过温育洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的【de】催化下转化成【chéng】蓝【lán】色，并在【zài】酸【suān】的作用下转化成黄色。颜色的【de】深浅【qiǎn】和样品【pǐn】中的大鼠N-甲基【jī】-D-天氡【dōng】氨酸离子能受体2A(GRIN2A)呈【chéng】正相关【guān】。用酶标仪在450nm 波长下测定【dìng】吸光度（OD 值），计【jì】算样品浓度【dù】。

实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或【huò】4℃过夜，然后1000×g离心【xīn】20 分【fèn】钟，取上清即可，或将【jiāng】上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反【fǎn】复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在【zài】采【cǎi】集后的30分钟【zhōng】内【nèi】于9-21℃ 1000×g离【lí】心【xīn】15分钟，取上清即可检测，或【huò】将上【shàng】清置于-20℃或-80℃保存【cún】，但应避【bì】免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗【xǐ】组织，去【qù】除残留血液（匀浆中【zhōng】裂解的红细胞会影响测【cè】量结果），称重后将【jiāng】组织剪碎。将剪【jiǎn】碎的组织与对应体【tǐ】积的PBS（一般按1:9的重量体【tǐ】积比，比【bǐ】如1g的组织样品对【duì】应9mL的PBS，具体体积可根【gēn】据【jù】实验【yàn】需【xū】要适【shì】当【dāng】调整，并做好记录。推荐在PBS中加入【rù】蛋白酶抑制剂【jì】）加入【rù】玻璃匀浆器中，于冰上充分研【yán】磨【mó】。为了进【jìn】一步【bù】裂解组织细胞，可以对匀浆【jiāng】液进行超【chāo】声破碎，或反复【fù】冻融。将匀浆液于【yú】5000×g离心5~10分钟，取上清【qīng】检测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取【qǔ】上【shàng】清【qīng】即【jí】可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免【miǎn】反复冻【dòng】融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内进【jìn】行检测的【de】可【kě】保存于4℃，若不能及时检【jiǎn】测，请【qǐng】按一次使【shǐ】用量【liàng】分装，冻存于-20℃（1个月内【nèi】检测【cè】），或-80℃（6个【gè】月内检测），避【bì】免反复冻融，标本溶血会影响检测结果【guǒ】，因此溶血【xuè】标本不【bú】宜进行此项检测。

注意事项：

1. 严格按照规定的【de】时间和温度【dù】进行温【wēn】育【yù】以保【bǎo】证准确结【jié】果【guǒ】。所有试剂都【dōu】必须在使用前达到室温9-21℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗【xǐ】板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物【wù】前确保尽量【liàng】吸干孔【kǒng】内【nèi】液体【tǐ】。温育过程中【zhōng】不要让微孔干燥掉【diào】。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶【róng】剂或漂白溶剂所散发【fā】的强烈【liè】气体。任何【hé】漂白成分都会破【pò】坏【huài】试剂盒中反应【yīng】试剂【jì】的生物【wù】活性【xìng】。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能【néng】传播疾【jí】病【bìng】，所有的样品都【dōu】应管理好【hǎo】，按照规定的【de】程序处理样品【pǐn】和检测装置。

操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝【lǚ】箔袋中取出【chū】所需板条【tiáo】，剩余板条【tiáo】用自【zì】封袋密封放回4℃。

2．设置标【biāo】准品孔【kǒng】和样本孔，标准品【pǐn】孔各加不同浓度的标准【zhǔn】品50μL。

3．样本孔中a加入待测样本50μL；空白孔不加。

4．除空【kōng】白孔外，标准品孔和样本【běn】孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记【jì】的检【jiǎn】测【cè】抗体100μL，用封板膜【mó】封住反应孔，37℃水浴锅或【huò】恒温箱温【wēn】育【yù】60min。

5．弃【qì】去液体，吸水【shuǐ】纸上拍干【gàn】，每【měi】孔加满【mǎn】洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如【rú】此【cǐ】重复洗板5次（也可用【yòng】洗板机洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入终止液【yè】50μL，15min内，在450nm波长【zhǎng】处测【cè】定各孔的【de】OD值【zhí】。

实验结果计算：

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以【yǐ】标准品浓度【dù】作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准【zhǔn】品线性回归曲线，按曲线方程计算各样【yàng】本浓度值【zhí】。

（此图仅供参考）

性能：
1. 检测范围：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

技术小提示：

1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染，配置【zhì】不【bú】同浓【nóng】度标准品、上【shàng】样【yàng】、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂【jì】请分别使用不【bú】同的【de】移液【yè】槽。

3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合后的显色底物在上板前应【yīng】为【wéi】无色，请避光保【bǎo】存【cún】；假如微【wēi】孔板后【hòu】，将由物色【sè】变成不【bú】同深度的蓝色。

5. 终【zhōng】止液上板顺序应同显【xiǎn】色底物上板顺序【xù】一致；加入【rù】终止液后，孔【kǒng】内【nèi】颜色由蓝变【biàn】黄；若孔内有绿色，则表明孔【kǒng】内【nèi】液体未混匀；请充分【fèn】混【hún】合。

说明：

1. 由于现有条件及科学技术水【shuǐ】平尚不能对所【suǒ】有供货商提供的所有原料进行【háng】全面的【de】鉴定与分析【xī】，本产品【pǐn】可【kě】能存在一定的质【zhì】量【liàng】技【jì】术风险。

2. 实验结【jié】果【guǒ】与试剂的有效性【xìng】、实验【yàn】者的相关操作以及【jí】当时的实验环境【jìng】密切相关，请务必准备【bèi】充足的标本【běn】备份。

3. 不同批次【cì】的【de】同【tóng】一产品可能会有【yǒu】少许差别【bié】，如【rú】：检测限、灵敏度以及显【xiǎn】色时间等，请依据【jù】试剂盒内说明书进【jìn】行实验操作，网站电子版说明【míng】书仅【jǐn】作参【cān】考。

4. 只有全部使用本试剂盒【hé】配套试剂才能【néng】保证检测效【xiào】果，不能混用其他制造商的【de】产品。只有严【yán】格遵守本【běn】试剂盒的实验说明才会得【dé】到检测【cè】结【jié】果。