小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

8.0 ng/L -240 ng/L

小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的：

本试剂盒用【yòng】于测定小鼠血清【qīng】、血浆及相关液体样本【běn】中8-羟【qiǎng】基鸟【niǎo】嘌【piào】呤（8-OHdG）含量。

实验原理

本试剂盒应用【yòng】双抗体夹心法【fǎ】测【cè】定标本中小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）水平。用纯【chún】化的小【xiǎo】鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）抗体包被微孔板【bǎn】，制成固相【xiàng】抗体，往包【bāo】被【bèi】单抗【kàng】的微孔中【zhōng】依次加入8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG），再与HRP标记的8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）抗体结合【hé】，形成抗体-抗原-酶【méi】标【biāo】抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显【xiǎn】色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝【lán】色，并【bìng】在酸的作用下转化成终的【de】。颜色的深浅和【hé】样品【pǐn】中的8-羟【qiǎng】基鸟【niǎo】嘌【piào】呤（8-OHdG）呈正相关。用酶【méi】标【biāo】仪在450nm波长下测定吸【xī】光【guāng】度【dù】（OD值【zhí】），通过标【biāo】准曲线计算样品中小鼠8-羟【qiǎng】基【jī】鸟嘌呤【lìng】（8-OHdG）浓【nóng】度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取【qǔ】，提取按相关文献进行，提取后应尽快【kuài】进【jìn】行实验【yàn】。若【ruò】不能【néng】马上进行【háng】试验，可将标本放于【yú】-20℃保存，但【dàn】应避免反【fǎn】复冻融【róng】

2．不能【néng】检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根【gēn】过氧化物酶的（HRP）活性【xìng】。

小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品【pǐn】的【de】稀释：本试剂【jì】盒提供【gòng】原倍标准品一【yī】支，用户可按【àn】照下【xià】列图表在小试【shì】管中进行稀释。

加【jiā】样【yàng】：分别设空白【bái】孔（空白【bái】对照孔不加样品【pǐn】及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准【zhǔn】孔、待测样品【pǐn】孔。在酶标包被板【bǎn】上标准品准确【què】加样50μl，待测【cè】样品孔中【zhōng】先加样品【pǐn】稀【xī】释液40μl，然【rán】后再加待测样品10μl（样品终稀释【shì】度为5倍）。加样将样品加于酶标板【bǎn】孔底部【bù】，尽量不触及【jí】孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用【yòng】封板膜封板【bǎn】后置【zhì】37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心【xīn】揭【jiē】掉【diào】封板膜【mó】，弃去液【yè】体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃【qì】去【qù】，如【rú】此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再【zài】加入显色【sè】剂【jì】B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀【yún】，37℃避光显色15分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序【xù】测量各【gè】孔的吸光度（OD值）。 测定应【yīng】在【zài】加终止液后15分【fèn】钟以内【nèi】进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度为【wéi】横坐标【biāo】，OD值为纵坐标【biāo】，在坐【zuò】标纸上绘出标【biāo】准【zhǔn】曲线【xiàn】，根据样品【pǐn】的OD值由标准曲线【xiàn】查出相应的【de】浓度；再【zài】乘以稀释倍数【shù】；或用标【biāo】准物的浓度与OD值【zhí】计【jì】算出标准【zhǔn】曲线的直线回归方程式，将样品【pǐn】的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为【wéi】样品【pǐn】的实【shí】际浓度。

小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温【wēn】平【píng】衡9-21分钟【zhōng】后方可使【shǐ】用，酶标【biāo】包被【bèi】板开封后【hòu】如未用完，板【bǎn】条应【yīng】装入密封袋中保存。

2．浓洗【xǐ】涤液可能会有结晶【jīng】析出【chū】，稀释时可在水浴中加温助溶，洗【xǐ】涤时不影响结【jié】果【guǒ】。

3．各步加样均应【yīng】使用加样【yàng】器，并经【jīng】常校对其【qí】准确性【xìng】，以避【bì】免试验【yàn】误差。一【yī】次加样时间控制在5分钟内，如【rú】标本数量多，推荐【jiàn】使用排枪加样。

请【qǐng】每次测定的【de】同时【shí】做标准曲线，做复孔。如标本【běn】中待测物【wù】质【zhì】含量【liàng】过【guò】高（样本OD值大【dà】于标准品孔孔【kǒng】的OD值），请【qǐng】先用样【yàng】品稀【xī】释液稀释一定倍数（n倍）后【hòu】再测定，计算时请【qǐng】后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说明【míng】书的操作【zuò】进行，试验结果判【pàn】定必须以酶标仪读数【shù】为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月