猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

2ng/L -90ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测【cè】定猪血清,血浆及【jí】相关【guān】液体【tǐ】样本中幽门螺旋菌（HP）含【hán】量。

猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应用【yòng】双【shuāng】抗体夹心法测定标本【běn】中猪【zhū】幽门螺旋菌【jun1】（HP）水平。用纯化的幽门螺旋【xuán】菌（HP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的【de】微【wēi】孔中【zhōng】依【yī】次加入幽门螺【luó】旋菌（HP），再【zài】与HRP标记的幽门螺旋菌（HP）抗体结合【hé】，形【xíng】成抗体-抗【kàng】原【yuán】-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显【xiǎn】色。TMB在【zài】HRP酶的催化【huà】下转化成【chéng】蓝色【sè】，并在酸的作用下转化【huà】成终的。颜色的深浅【qiǎn】和样品中的幽门【mén】螺旋菌（HP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光【guāng】度（OD值【zhí】），通过【guò】标准【zhǔn】曲线计算样品中猪幽门螺【luó】旋菌【jun1】（HP）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后尽早【zǎo】进行提【tí】取，提取按相【xiàng】关文献进行，提取【qǔ】后应【yīng】尽快进行实验。若不能马上进行试【shì】验【yàn】，可将标本放于-20℃保存，但应【yīng】避免反复【fù】冻融【róng】

2．不能检【jiǎn】测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根【gēn】过氧化物【wù】酶的【de】（HRP）活性。

猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒【hé】提【tí】供原【yuán】倍标【biāo】准品一支，用户可按照下列【liè】图表在小试管【guǎn】中【zhōng】进行稀释【shì】。

加样：分别设空【kōng】白孔（空【kōng】白对【duì】照孔不【bú】加【jiā】样品【pǐn】及酶标试剂【jì】，其余【yú】各【gè】步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准【zhǔn】品准确加样50μl，待【dài】测样【yàng】品孔中先加样品稀释【shì】液【yè】40μl，然后再加待测样品【pǐn】10μl（样【yàng】品终【zhōng】稀释度为【wéi】5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混【hún】匀。
温育：用【yòng】封板膜封板【bǎn】后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤【dí】：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干【gàn】，每【měi】孔加满洗涤液，静置30秒【miǎo】后弃去，如此【cǐ】重复5次【cì】，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每【měi】孔先加入显色剂A50μl，再加【jiā】入显色【sè】剂【jì】B50μl，轻轻震荡混【hún】匀，37℃避【bì】光显色10分【fèn】钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空白【bái】空调零，450nm波长依序【xù】测量各孔的吸光度【dù】（OD值）。 测定应在加终【zhōng】止【zhǐ】液后15分【fèn】钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标【biāo】准【zhǔn】物的浓度为横坐标，OD值为【wéi】纵坐标，在坐标纸上绘出【chū】标准曲线，根据样【yàng】品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀【xī】释倍数；或用【yòng】标准【zhǔn】物【wù】的【de】浓度与OD值计算出标【biāo】准曲【qǔ】线【xiàn】的直线回归方程式，将【jiāng】样【yàng】品的【de】OD值代【dài】入方程式，计算出样品浓度【dù】，再【zài】乘【chéng】以稀释倍数，即为样品的实际浓【nóng】度。

猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从【cóng】冷藏【cáng】环【huán】境中【zhōng】取出应在室温平【píng】衡9-21分钟【zhōng】后方可使用【yòng】，酶【méi】标包被板开【kāi】封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗【xǐ】涤液可【kě】能会有结晶析【xī】出【chū】，稀释时可在水浴中加温助溶，洗【xǐ】涤【dí】时【shí】不影响结果。

3．各步加【jiā】样【yàng】均应【yīng】使用加样【yàng】器，并经【jīng】常校【xiào】对其准【zhǔn】确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分【fèn】钟内【nèi】，如标本数量多，推【tuī】荐使【shǐ】用排枪加样。

请每次测【cè】定的同【tóng】时【shí】做【zuò】标准曲线【xiàn】，做复孔。如标本中待测物质含量【liàng】过高（样本OD值大于标准品孔孔的【de】OD值【zhí】），请先用【yòng】样品【pǐn】稀释液稀【xī】释一【yī】定倍【bèi】数（n倍）后再测定，计【jì】算时请后乘以总稀释【shì】倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格【gé】按【àn】照说明书的操作【zuò】进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月