人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

50pg/ml - 1800pg/ml

使用目的：

本试剂【jì】盒用于测定【dìng】人血清、血【xuè】浆及【jí】相关【guān】液体样本中酪氨酸羟【qiǎng】化酶(TH)含量。

人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应用双抗体【tǐ】夹心法测定标本中人酪氨酸羟【qiǎng】化酶【méi】(TH)水平【píng】。用纯化的人酪氨酸羟化【huà】酶(TH)抗体包【bāo】被【bèi】微孔板，制【zhì】成固相抗体，往包被单抗的微【wēi】孔【kǒng】中依次【cì】加入酪氨酸羟化酶(TH)，再与HRP标【biāo】记的酪氨酸羟化酶(TH)抗体结合，形成抗体【tǐ】-抗原【yuán】-酶标抗体复合【hé】物，经过*洗涤【dí】后加【jiā】底物TMB显色。TMB在HRP酶的【de】催【cuī】化下转化成蓝色【sè】，并在酸的作用下转化成终【zhōng】的。颜色【sè】的深浅和样品中的酪氨酸【suān】羟化酶(TH)呈【chéng】正相关。用【yòng】酶【méi】标仪在450nm波【bō】长下测定【dìng】吸光度【dù】（OD值），通过标准曲线计算【suàn】样品【pǐn】中人酪氨酸羟化酶(TH)的浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集【jí】后尽【jìn】早进行提取【qǔ】，提取按相关文献【xiàn】进行，提取后应尽快进【jìn】行实验。若不能马【mǎ】上进行【háng】试验，可将标本放于【yú】-20℃保存，但【dàn】应【yīng】避免反复【fù】冻融

2．不能检测含NaN3的【de】样品，因NaN3抑【yì】制辣根【gēn】过氧化物酶的（HRP）活性。

人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标【biāo】准【zhǔn】品的稀【xī】释：本【běn】试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按【àn】照下列图表在小试管中进行稀释。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标【biāo】试剂，其【qí】余【yú】各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板【bǎn】上标准品准【zhǔn】确加样50μl，待测样品孔【kǒng】中先【xiān】加样品稀释液【yè】40μl，然后再加【jiā】待【dài】测样【yàng】品【pǐn】10μl（样品终【zhōng】稀释【shì】度为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶标板【bǎn】孔【kǒng】底部，尽量不【bú】触【chù】及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后【hòu】置37℃温【wēn】育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小心揭掉封板膜，弃去【qù】液体，甩干，每【měi】孔【kǒng】加满洗【xǐ】涤液，静置30秒后弃去【qù】，如此重复【fù】5次，拍干【gàn】。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色【sè】：每孔先【xiān】加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻【qīng】震荡【dàng】混匀【yún】，37℃避光【guāng】显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空白空调【diào】零，450nm波长依序测量各孔【kǒng】的吸光度（OD值）。 测定应【yīng】在加终止液后【hòu】15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度【dù】为【wéi】横坐标，OD值为纵【zòng】坐标，在坐标纸上绘出标准【zhǔn】曲线，根据样品的OD值由标准曲【qǔ】线查出【chū】相【xiàng】应的浓【nóng】度；再乘【chéng】以【yǐ】稀释倍数【shù】；或用【yòng】标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回【huí】归方程式，将样【yàng】品的【de】OD值代入方程式，计【jì】算出样品浓度，再【zài】乘【chéng】以【yǐ】稀释【shì】倍数，即为样品的【de】实际浓度。

人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏【cáng】环境【jìng】中取出应在室温平衡【héng】9-21分钟后【hòu】方可使用，酶标包被板开封【fēng】后【hòu】如未用完，板条应装【zhuāng】入密封袋【dài】中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析【xī】出，稀释时可在水【shuǐ】浴中加温助【zhù】溶，洗涤【dí】时不【bú】影响【xiǎng】结果。

3．各【gè】步加样均应使【shǐ】用加【jiā】样器，并经常校对其准【zhǔn】确性，以避免试验误差【chà】。一【yī】次加样时间控制【zhì】在【zài】5分【fèn】钟【zhōng】内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

请每次【cì】测【cè】定的同时【shí】做标准曲线，做复孔。如标本【běn】中待测物【wù】质【zhì】含量过【guò】高（样【yàng】本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀【xī】释【shì】液稀释一定倍数【shù】（n倍）后再测【cè】定【dìng】，计【jì】算时【shí】请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书【shū】的操作进行，试验结果判定必【bì】须【xū】以【yǐ】酶【méi】标仪读【dú】数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月