小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：  96T

5 U/mL - 130 U/mL

使用目的：

本【běn】试【shì】剂盒用于【yú】测定小【xiǎo】鼠【shǔ】血清、血浆及相关液【yè】体样本中超【chāo】氧化物歧化酶（SOD）活性。

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试【shì】剂盒应【yīng】用双抗体夹心【xīn】法测定标本【běn】中小鼠超【chāo】氧化物【wù】歧化酶（SOD）水平。用【yòng】纯化的小鼠超氧【yǎng】化【huà】物【wù】歧化酶【méi】（SOD）抗体包被微孔板，制成【chéng】固相抗体【tǐ】，往包【bāo】被单抗的微孔中依【yī】次加入超氧化物歧化酶（SOD），再与HRP标记的超【chāo】氧化物歧化酶【méi】（SOD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复【fù】合物【wù】，经过*洗【xǐ】涤后加底【dǐ】物TMB显色【sè】。TMB在HRP酶的催【cuī】化下【xià】转【zhuǎn】化成蓝【lán】色，并【bìng】在酸的作用下转化成终【zhōng】的。颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶（SOD）呈正相关【guān】。用酶标【biāo】仪在450nm波长下【xià】测【cè】定吸【xī】光度【dù】（OD值），通过【guò】标准曲【qǔ】线计算样品中小【xiǎo】鼠超氧化物歧化【huà】酶【méi】（SOD）活性浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标【biāo】本采集【jí】后尽早进行提取【qǔ】，提取按相关文献进行【háng】，提取后【hòu】应【yīng】尽快进行【háng】实验。若【ruò】不能【néng】马上【shàng】进行【háng】试验，可将【jiāng】标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检【jiǎn】测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣【là】根过氧化物酶的【de】（HRP）活性。

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品【pǐn】的稀释：本试剂盒提供原倍标准品【pǐn】一支【zhī】，用户可按【àn】照【zhào】下列【liè】图表在小试【shì】管中进行【háng】稀释。

加样：分别设空白孔（空白对照【zhào】孔【kǒng】不加【jiā】样品及酶标试剂，其余【yú】各步操【cāo】作相同）、标准孔【kǒng】、待测【cè】样品【pǐn】孔。在【zài】酶标【biāo】包【bāo】被板上标准品【pǐn】准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液【yè】40μl，然【rán】后再【zài】加待【dài】测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔【kǒng】底部，尽量不触及孔壁，轻【qīng】轻【qīng】晃动【dòng】混匀。

温【wēn】育【yù】：用封板膜封板后置37℃温【wēn】育30分【fèn】钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小心揭掉封板【bǎn】膜，弃【qì】去液体，甩干，每孔加【jiā】满洗涤液，静【jìng】置30秒后【hòu】弃去，如此【cǐ】重【chóng】复5次，拍【pāi】干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入【rù】显【xiǎn】色剂B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀，37℃避【bì】光显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空【kōng】白空调零，450nm波【bō】长依序测【cè】量各【gè】孔【kǒng】的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓【nóng】度【dù】为【wéi】横坐标，OD值【zhí】为纵坐【zuò】标【biāo】，在坐标纸上绘出标准曲线，根【gēn】据样品的OD值由标准曲线查【chá】出相应【yīng】的浓度【dù】；再乘【chéng】以稀释倍数；或【huò】用标准物的【de】浓度【dù】与【yǔ】OD值计算出标【biāo】准曲线的【de】直线回【huí】归方程式，将样品【pǐn】的OD值代入方程式，计算【suàn】出样品浓【nóng】度，再【zài】乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环【huán】境中【zhōng】取【qǔ】出应在室温平衡9-21分钟后方可使【shǐ】用【yòng】，酶标包【bāo】被【bèi】板开封后如未用【yòng】完，板条应装入【rù】密封袋【dài】中保存。

2．浓洗涤液可能会有【yǒu】结晶【jīng】析【xī】出，稀释时【shí】可在水浴中加温助【zhù】溶，洗涤时【shí】不影响【xiǎng】结果。

3．各步加【jiā】样均【jun1】应使用加样器，并经【jīng】常校对其准确性，以避免试验误【wù】差。一【yī】次【cì】加样时间控制【zhì】在5分钟内，如标本数【shù】量多【duō】，推荐使【shǐ】用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本【běn】中待测物质含【hán】量过【guò】高【gāo】（样本OD值大于标【biāo】准品【pǐn】孔【kǒng】孔的OD值【zhí】），请先用样品稀释液稀释一定【dìng】倍数（n倍）后再测【cè】定，计【jì】算时请后乘以【yǐ】总稀【xī】释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说明书的操作进行，试【shì】验结果判定【dìng】必须以酶标【biāo】仪【yí】读数为【wéi】准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月