人前列腺癌细胞 （VCaP）

人前列腺癌细胞 (VCaP)
细胞介绍：
1997从一位不【bú】受激【jī】素影响的前列腺癌患者脊椎转移灶【zào】中建立了这株细【xì】胞。先在小鼠中进行【háng】异种移植传代，随后进行体外培【péi】养。体【tǐ】内及体外【wài】都【dōu】对雄性激素【sù】敏感。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO，添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。（DMEM 液体培养【yǎng】基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条件：气【qì】相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基【jī】，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培【péi】养【yǎng】基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培【péi】养瓶中培【péi】养【yǎng】过夜【yè】（或将细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二【èr】天换液并检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人前列腺癌细胞 (VCaP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后在显微【wēi】镜【jìng】下【xià】观察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大【dà】部【bù】分【fèn】变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基【jī】终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻【dòng】存【cún】：待细【xì】胞生【shēng】长状态良好时，可【kě】进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去【qù】培养基后加【jiā】入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变【biàn】圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的培养基后【hòu】 加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。

注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破损及细【xì】胞有污【wū】染，请立即【jí】与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在【zài】的生物危害性，必须在二【èr】级生物安【ān】全【quán】台内操作，并请注意【yì】防护【hù】，所有废液【yè】及接触过【guò】此细胞【bāo】的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人前列腺癌细胞 (VCaP)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞【bāo】。收到细胞【bāo】后【hòu】，可在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条件【jiàn】下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清【qīng】，加入推荐使用的培【péi】养基【jī】后转移【yí】至l〇cm培养皿或者T75培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，再进行【háng】冻存。具体【tǐ】操作见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。