大鼠SQSTM1ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠SQSTM1ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温，所有标准品和样【yàng】品必【bì】需设置【zhì】平行对照实验，快【kuài】速【sù】加【jiā】入试剂至样【yàng】品【pǐn】中，立即漩【xuán】涡震荡2秒混【hún】匀。

1. 依据实验键盘纸【zhǐ】决定【dìng】酶标条的使【shǐ】用量，将剩余的酶标【biāo】条【tiáo】连【lián】同干燥剂一起放【fàng】回密封塑料袋，密【mì】封，4℃保存。

2. 移【yí】取50μL中【zhōng】和液至【zhì】各个微孔中，除了TA（全活【huó】性）孔和Blank（空白）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至【zhì】NSB(非【fēi】特异【yì】结合)孔和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至【zhì】NSB（非特异结合）孔。

7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA（全【quán】活【huó】性）孔和Blank（空白）孔。

8. 移取50μL 抗体工作液至各【gè】孔【kǒng】中，除了TA（全活性）孔、Blank（空【kōng】白）孔和NSB（非特异结合）孔。

9. 将酶标孔置于孔【kǒng】板【bǎn】振动器上，250~500rpm，室温孵育2小【xiǎo】时【shí】。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每【měi】次需拍【pāi】干【gàn】。

11. 后一【yī】次洗涤，清空各微孔，在干净的【de】无尘吸水【shuǐ】纸上轻巧酶标【biāo】板数次，以确【què】保没有洗【xǐ】涤液残【cán】留【liú】。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物【wù】溶液，于室【shì】温【wēn】静置5~30分钟【zhōng】。（显色底【dǐ】物A和B需在临用前15分钟【zhōng】内等【děng】体积【jī】混合，并避光放置【zhì】）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶【méi】标仪Blank（空白【bái】）孔值，读【dú】取【qǔ】450nm处的光密度值，在570nm至【zhì】590nm之【zhī】间【jiān】好有修正，如果酶【méi】标仪不能自【zì】动清除Blank(空白)孔值，那么【me】手动扣除每个【gè】读数的Blank（空白【bái】）孔【kǒng】光密度值。

注意事项：

1. 用【yòng】户在初次使用【yòng】试剂盒【hé】时【shí】，应【yīng】将各种试剂管离心数分钟，以便试剂【jì】集中到【dào】管底。

2. 每次实【shí】验留【liú】一孔作为空白调【diào】零孔【kǒng】，该孔不加任何试剂，只是zui后加底【dǐ】物溶液及2N H2SO4，测量时先用此【cǐ】孔调OD值【zhí】至零。

3. 为防止样【yàng】品蒸发，试【shì】验时将反应板放于铺【pù】有湿布【bù】的【de】密闭盒内，酶【méi】标板加上盖或覆膜。

4. 未【wèi】使用完的酶标板或者试剂【jì】，请于9-22℃保存，标【biāo】准品、生物-素标记抗体工作液、辣根【gēn】过氧化物酶标【biāo】记【jì】亲和【hé】素工作液请【qǐng】依据所需【xū】的量【liàng】配置使用【yòng】，请【qǐng】勿重复使用已稀【xī】释过的标【biāo】准品、生物-素标记【jì】抗【kàng】体工作液或、辣根过【guò】氧化物酶【méi】标记亲和素工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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