大鼠leptin ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠leptin ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前将各种试剂取出【chū】放置30分钟【zhōng】，平衡至室温【wēn】，所有标准品和【hé】样品必需设置平行对照【zhào】实验【yàn】，快速【sù】加【jiā】入试剂至样品中【zhōng】，立【lì】即【jí】漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸【zhǐ】决定酶标条的【de】使用量，将剩余【yú】的酶标条连同干【gàn】燥剂一【yī】起放回密封塑【sù】料袋，密封【fēng】，4℃保存【cún】。

2. 移取50μL中和液至【zhì】各个微孔【kǒng】中【zhōng】，除了TA（全活性）孔和Blank（空【kōng】白）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异【yì】结合)孔和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取【qǔ】50μL 0.1M HCl至NSB（非特【tè】异结合【hé】）孔【kǒng】。

7. 移取50μL 偶联【lián】酶【méi】至【zhì】各孔中，除了TA（全活性）孔【kǒng】和【hé】Blank（空白）孔。

8. 移取50μL 抗体工【gōng】作液【yè】至各孔中，除【chú】了TA（全活性）孔、Blank（空白【bái】）孔【kǒng】和NSB（非特异结合）孔。

9. 将酶标孔置于【yú】孔板振动【dòng】器上，250~500rpm，室温孵育2小【xiǎo】时【shí】。

10. 在吸【xī】水【shuǐ】纸上【shàng】拍干微孔内溶液，加洗【xǐ】涤液400μL每孔洗3次【cì】，每次需拍干。

11. 后一次洗【xǐ】涤，清空各微孔【kǒng】，在【zài】干净的无尘吸水纸上轻巧【qiǎo】酶标板数【shù】次【cì】，以确【què】保没有洗涤【dí】液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每【měi】孔200μL显色【sè】底物溶【róng】液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需【xū】在临用前15分钟内【nèi】等体积【jī】混合，并避光放【fàng】置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清【qīng】除酶标仪Blank（空白）孔【kǒng】值，读取450nm处的【de】光密度值，在570nm至590nm之【zhī】间好有修正，如果【guǒ】酶标仪不能自动清【qīng】除Blank(空白)孔【kǒng】值，那么手动扣除每个读数的Blank（空白）孔光【guāng】密【mì】度值。

注意事项：

1. 用户在【zài】初次使用试剂盒【hé】时，应将各种试剂管【guǎn】离心数【shù】分【fèn】钟，以便试剂集中【zhōng】到管【guǎn】底。

2. 每次实验留一【yī】孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂【jì】，只【zhī】是zui后加底物溶液及2N H2SO4，测【cè】量【liàng】时先用此孔调【diào】OD值至零。

3. 为【wéi】防止样品蒸发，试【shì】验【yàn】时将反【fǎn】应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板【bǎn】加【jiā】上盖或覆膜。

4. 未使用完的【de】酶标板或者试【shì】剂，请于【yú】9-22℃保存，标准品、生物-素标记抗【kàng】体工作液、辣根过氧化【huà】物酶标记【jì】亲和【hé】素工【gōng】作液请【qǐng】依据【jù】所需的量配置使【shǐ】用，请勿重复使用【yòng】已【yǐ】稀释过的标【biāo】准品、生物-素标【biāo】记抗体工作液或、辣【là】根过氧化物【wù】酶标记亲和素工作液【yè】。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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