大鼠HIF-1a ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠HIF-1a ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用【yòng】前将各种试【shì】剂取出放置30分【fèn】钟，平衡至室【shì】温【wēn】，所【suǒ】有标准品和样【yàng】品必【bì】需设置【zhì】平行对照实验，快速加入试剂至样品中，立即漩【xuán】涡震【zhèn】荡【dàng】2秒混匀。

1. 依据实验【yàn】键盘纸决定酶标条的使用【yòng】量，将剩【shèng】余的【de】酶标条连同干燥剂一起放回密封【fēng】塑料袋，密封【fēng】，4℃保【bǎo】存。

2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除【chú】了【le】TA（全活性【xìng】）孔【kǒng】和【hé】Blank（空白）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合【hé】)孔和B0孔【kǒng】（0 pmol/mL cAMP标【biāo】准品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至【zhì】NSB（非特异结合【hé】）孔。

7. 移【yí】取50μL 偶联【lián】酶至各孔中【zhōng】，除了【le】TA（全活性）孔和【hé】Blank（空【kōng】白）孔。

8. 移【yí】取【qǔ】50μL 抗体【tǐ】工【gōng】作液【yè】至各【gè】孔中，除了TA（全活性）孔、Blank（空白）孔和NSB（非【fēi】特异结合）孔。

9. 将【jiāng】酶【méi】标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室【shì】温孵育2小时【shí】。

10. 在【zài】吸【xī】水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每【měi】孔洗【xǐ】3次，每次【cì】需【xū】拍干。

11. 后一【yī】次洗涤，清【qīng】空【kōng】各微孔，在干净【jìng】的无尘吸水纸【zhǐ】上轻巧酶标【biāo】板数次，以【yǐ】确【què】保没有洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显【xiǎn】色底物溶液【yè】，于室温【wēn】静置5~30分钟。（显色底【dǐ】物A和B需在临【lín】用前15分钟内等体积【jī】混【hún】合，并避【bì】光放【fàng】置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标【biāo】仪Blank（空白）孔值，读【dú】取【qǔ】450nm处的光【guāng】密【mì】度值，在570nm至590nm之间【jiān】好有修【xiū】正，如【rú】果酶标【biāo】仪不【bú】能自动清除Blank(空【kōng】白)孔值，那么手动扣除【chú】每【měi】个读数的Blank（空白）孔光密【mì】度值。

注意事项：

1. 用户在初【chū】次【cì】使用试剂盒时，应将【jiāng】各种试剂管离心【xīn】数【shù】分钟，以便【biàn】试剂集中到管底。

2. 每次实【shí】验留【liú】一孔作【zuò】为空【kōng】白调【diào】零孔，该孔不加任【rèn】何试剂，只是zui后【hòu】加底物溶液及2N H2SO4，测量【liàng】时先用此孔调OD值至零。

3. 为【wéi】防止样品【pǐn】蒸发，试【shì】验时将反应板放于铺有湿布的密闭【bì】盒内，酶【méi】标板【bǎn】加上盖或覆【fù】膜。

4. 未【wèi】使用完的酶标板或者试剂【jì】，请【qǐng】于9-22℃保存，标准【zhǔn】品、生【shēng】物-素标记抗体工作液、辣根【gēn】过氧化物酶标记亲和素【sù】工【gōng】作【zuò】液请【qǐng】依据所需的【de】量【liàng】配置使用【yòng】，请勿重复使用已稀释过的标准品、生物-素标【biāo】记抗【kàng】体工作【zuò】液或、辣根过氧化物酶标记亲和【hé】素工【gōng】作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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