大鼠 Thrombin 试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠 Thrombin 试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使【shǐ】用【yòng】前【qián】将各种试剂取出【chū】放置30分【fèn】钟，平衡至【zhì】室温，所【suǒ】有标准品【pǐn】和样品【pǐn】必需设置平行对照【zhào】实【shí】验，快速加入试剂至样品中，立即漩涡震【zhèn】荡2秒混匀。

1. 依据【jù】实验键【jiàn】盘纸决【jué】定酶标条的【de】使用量，将剩余的酶标【biāo】条连【lián】同干燥剂一起放回密封塑料袋，密【mì】封，4℃保存。

2. 移取50μL中和【hé】液至各个微孔中，除了TA（全活性）孔和【hé】Blank（空【kōng】白）孔。

3. 移取【qǔ】100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准【zhǔn】品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至【zhì】NSB（非特【tè】异结合）孔。

7. 移取50μL 偶联酶至【zhì】各孔中【zhōng】，除了TA（全活【huó】性）孔和Blank（空【kōng】白）孔。

8. 移取50μL 抗体工作液至各孔中，除【chú】了TA（全活性）孔、Blank（空白）孔和NSB（非特异结【jié】合【hé】）孔。

9. 将酶标【biāo】孔置于孔板振动【dòng】器【qì】上，250~500rpm，室温孵育2小时【shí】。

10. 在吸【xī】水【shuǐ】纸上拍干微孔内【nèi】溶【róng】液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一【yī】次洗涤，清空各微【wēi】孔【kǒng】，在干净的无尘吸【xī】水纸上轻巧【qiǎo】酶标板数【shù】次，以【yǐ】确保没有洗涤【dí】液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色【sè】底物溶液【yè】，于室【shì】温静置5~30分钟。（显色【sè】底物A和B需在临用前15分钟【zhōng】内等体积【jī】混合，并避光【guāng】放置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶【méi】标仪Blank（空白【bái】）孔值【zhí】，读取【qǔ】450nm处【chù】的光密度值，在570nm至590nm之间好有修正，如【rú】果酶标【biāo】仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每【měi】个读数的【de】Blank（空【kōng】白）孔光密度值。

注意事项：

1. 用户在【zài】初次使用试剂盒时，应【yīng】将各【gè】种【zhǒng】试【shì】剂【jì】管离心数分钟，以便试剂集中【zhōng】到管底。

2. 每次实验【yàn】留【liú】一孔作为空白【bái】调零【líng】孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶【róng】液及2N H2SO4，测量时先用此【cǐ】孔调【diào】OD值至零。

3. 为防止【zhǐ】样品蒸发，试【shì】验时将反应【yīng】板放【fàng】于铺有湿布【bù】的密闭盒内，酶标【biāo】板加上【shàng】盖或覆膜。

4. 未【wèi】使用完的酶【méi】标板【bǎn】或者试剂【jì】，请于9-22℃保存，标准品【pǐn】、生物-素【sù】标记【jì】抗【kàng】体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和【hé】素工作液请依据所需的量【liàng】配置使用，请勿重复使用已稀释【shì】过的标准品、生物-素【sù】标【biāo】记抗体工【gōng】作液或、辣根过氧【yǎng】化物酶标记亲和【hé】素【sù】工作【zuò】液【yè】。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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