大鼠visfatin 试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠visfatin 试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至【zhì】室温，所【suǒ】有标【biāo】准品和样【yàng】品【pǐn】必需设置平行对照实【shí】验【yàn】，快速【sù】加入试剂【jì】至样品中，立即【jí】漩涡震荡2秒混匀【yún】。

1. 依据实【shí】验【yàn】键盘纸【zhǐ】决定酶标条【tiáo】的使用量，将剩余【yú】的酶标【biāo】条连同干燥【zào】剂一起放回密封塑【sù】料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各【gè】个微【wēi】孔【kǒng】中，除了TA（全活【huó】性）孔和Blank（空【kōng】白）孔。

3. 移取【qǔ】100μL 0.1M HCl至NSB(非特【tè】异结合)孔【kǒng】和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准品【pǐn】）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移【yí】取50μL 0.1M HCl至NSB（非特异结合）孔。

7. 移取【qǔ】50μL 偶联酶至各孔中【zhōng】，除了【le】TA（全【quán】活性）孔和Blank（空白）孔。

8. 移【yí】取50μL 抗体工作液至各孔中，除了TA（全活【huó】性）孔、Blank（空【kōng】白）孔和NSB（非【fēi】特异结合）孔。

9. 将【jiāng】酶标【biāo】孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温【wēn】孵育【yù】2小时。

10. 在吸水纸上拍干【gàn】微【wēi】孔内【nèi】溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的【de】无【wú】尘【chén】吸水纸上轻巧酶【méi】标板数【shù】次，以确保没【méi】有洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物【wù】溶液，于室温静【jìng】置【zhì】5~30分钟。（显色底物A和【hé】B需【xū】在【zài】临用前15分钟内等体积混【hún】合，并【bìng】避【bì】光放置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标仪Blank（空白【bái】）孔【kǒng】值，读取450nm处【chù】的光密度值，在570nm至【zhì】590nm之间【jiān】好有修正，如果酶标【biāo】仪不能自【zì】动清除Blank(空白)孔值【zhí】，那么手动【dòng】扣除每【měi】个读【dú】数的Blank（空白）孔光密【mì】度值。

注意事项：

1. 用户在初次使用试剂盒【hé】时，应将各【gè】种【zhǒng】试【shì】剂【jì】管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空【kōng】白调零孔【kǒng】，该【gāi】孔【kǒng】不加任何试剂，只是zui后【hòu】加底【dǐ】物溶液及2N H2SO4，测【cè】量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止【zhǐ】样品蒸发，试【shì】验【yàn】时将反应板放于铺有【yǒu】湿【shī】布的密闭【bì】盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完【wán】的酶标板或者试【shì】剂，请于9-22℃保存，标准品、生【shēng】物【wù】-素标记抗体【tǐ】工作液、辣根过【guò】氧化物酶标记亲和素【sù】工作液请【qǐng】依据所需的量配置使【shǐ】用【yòng】，请勿重复使用【yòng】已稀释过的标准品【pǐn】、生物-素标记抗体工作液或、辣根【gēn】过【guò】氧化物【wù】酶【méi】标记亲和素【sù】工【gōng】作液【yè】。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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