大鼠 ET-1 ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠 ET-1 ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前将各【gè】种试【shì】剂取出放置30分钟，平衡至室温，所有【yǒu】标准【zhǔn】品和样品必需【xū】设置【zhì】平行对照实验，快速【sù】加【jiā】入试剂至样品【pǐn】中，立【lì】即漩【xuán】涡震荡【dàng】2秒混匀。

1. 依据【jù】实【shí】验键盘纸决【jué】定酶标条的使用量，将剩【shèng】余的酶标条连【lián】同干燥剂一起【qǐ】放回密封【fēng】塑料【liào】袋，密封，4℃保存。

2. 移【yí】取50μL中和液至各个微孔中【zhōng】，除了【le】TA（全活性）孔和Blank（空【kōng】白）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特【tè】异结合)孔【kǒng】和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准品【pǐn】）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取【qǔ】50μL 0.1M HCl至NSB（非【fēi】特异结合【hé】）孔。

7. 移【yí】取50μL 偶【ǒu】联酶至各孔中，除了【le】TA（全活性）孔和【hé】Blank（空白【bái】）孔。

8. 移取50μL 抗【kàng】体工作液至各孔中【zhōng】，除【chú】了TA（全【quán】活性【xìng】）孔、Blank（空白）孔和NSB（非特异结【jié】合）孔。

9. 将酶标孔【kǒng】置于孔【kǒng】板振动器上，250~500rpm，室温【wēn】孵育【yù】2小时。

10. 在【zài】吸水【shuǐ】纸上拍干微孔【kǒng】内溶液，加洗涤液400μL每孔洗【xǐ】3次，每次需【xū】拍干。

11. 后一【yī】次【cì】洗涤，清空各微孔，在干净的【de】无尘吸【xī】水纸上轻巧【qiǎo】酶标板【bǎn】数次，以确【què】保没有洗涤液残留【liú】。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔【kǒng】200μL显色底物溶液【yè】，于室温静置5~30分【fèn】钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内【nèi】等体【tǐ】积混合【hé】，并避光放置【zhì】）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标【biāo】仪Blank（空白）孔值，读取450nm处的光密度值【zhí】，在570nm至590nm之间好【hǎo】有修【xiū】正【zhèng】，如果酶标仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每【měi】个读数【shù】的Blank（空【kōng】白）孔光密【mì】度【dù】值。

注意事项：

1. 用户【hù】在初次【cì】使用试剂盒时，应将各种试【shì】剂管离心数分【fèn】钟，以便试剂集【jí】中到管底。

2. 每次【cì】实【shí】验留【liú】一孔作【zuò】为空白调零孔【kǒng】，该孔不【bú】加任【rèn】何试剂，只是zui后加底物溶液【yè】及2N H2SO4，测量时先用【yòng】此孔调OD值至零。

3. 为【wéi】防止【zhǐ】样【yàng】品蒸发，试【shì】验时将反应【yīng】板放于铺有湿布【bù】的密闭盒内，酶标板加上盖【gài】或覆膜。

4. 未使用【yòng】完的酶标板或者试剂，请于9-22℃保存，标准品、生物-素标记抗【kàng】体工作液、辣根过氧【yǎng】化物酶【méi】标记亲【qīn】和素工作液请依据所【suǒ】需的量配置使用【yòng】，请勿【wù】重【chóng】复使用已稀释过的标准品【pǐn】、生物-素标记【jì】抗体【tǐ】工作【zuò】液或、辣【là】根过氧【yǎng】化物酶标记【jì】亲和【hé】素【sù】工作【zuò】液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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