大鼠 ET ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠 ET ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使【shǐ】用前将各种【zhǒng】试剂取出放置【zhì】30分钟，平衡至室温【wēn】，所【suǒ】有【yǒu】标准品和【hé】样【yàng】品必需设【shè】置【zhì】平行对照实验，快【kuài】速加【jiā】入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实【shí】验键盘纸决定酶标条的【de】使用量，将【jiāng】剩余的酶标条【tiáo】连同干燥剂【jì】一【yī】起放回【huí】密封【fēng】塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移【yí】取50μL中和液至【zhì】各个微孔【kǒng】中，除了【le】TA（全活性）孔和Blank（空白【bái】）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特【tè】异结合【hé】)孔和B0孔【kǒng】（0 pmol/mL cAMP标准【zhǔn】品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取【qǔ】50μL 0.1M HCl至【zhì】NSB（非特异结合）孔【kǒng】。

7. 移【yí】取50μL 偶联酶至各【gè】孔中，除了TA（全活【huó】性）孔和【hé】Blank（空白）孔。

8. 移取50μL 抗体工作【zuò】液至各孔【kǒng】中，除了【le】TA（全活性）孔、Blank（空白）孔和【hé】NSB（非特异结合）孔。

9. 将酶标【biāo】孔置于孔板振动【dòng】器上【shàng】，250~500rpm，室【shì】温孵【fū】育2小时。

10. 在吸水【shuǐ】纸上【shàng】拍干微孔内溶【róng】液，加洗【xǐ】涤液【yè】400μL每孔【kǒng】洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的【de】无尘【chén】吸水纸上轻巧酶标【biāo】板【bǎn】数次，以确【què】保没有洗【xǐ】涤液残【cán】留【liú】。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显【xiǎn】色底物溶液，于室温静【jìng】置5~30分钟【zhōng】。（显色【sè】底物【wù】A和B需在临用【yòng】前15分钟内【nèi】等体积混合【hé】，并避光放置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标仪Blank（空白）孔值，读取450nm处【chù】的光密【mì】度值，在570nm至590nm之间好有修【xiū】正，如果酶标【biāo】仪不能自动清除Blank(空【kōng】白)孔【kǒng】值，那么手动扣除每【měi】个读数的Blank（空白）孔光密度值【zhí】。

注意事项：

1. 用户在初次使用【yòng】试剂【jì】盒时，应将【jiāng】各种试剂管离心数分钟【zhōng】，以便试【shì】剂【jì】集中到【dào】管底。

2. 每【měi】次实验留一孔作为【wéi】空白调零孔，该孔不【bú】加任何试【shì】剂，只是zui后加【jiā】底【dǐ】物溶液及2N H2SO4，测【cè】量时【shí】先【xiān】用此孔调OD值至零。

3. 为【wéi】防【fáng】止样品蒸发，试验时【shí】将反应板放【fàng】于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加【jiā】上盖【gài】或覆膜。

4. 未使用【yòng】完的酶标板【bǎn】或者【zhě】试剂，请于9-22℃保存，标准品、生物-素标记抗体【tǐ】工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请【qǐng】依【yī】据【jù】所【suǒ】需【xū】的量【liàng】配置使用，请勿【wù】重复使用已稀释【shì】过的【de】标准品、生物-素标记抗体工作液或、辣根过氧【yǎng】化物酶标【biāo】记亲和素工【gōng】作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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