大鼠 Caspase3试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠 Caspase3试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使【shǐ】用前将各种试剂取出放置【zhì】30分钟，平衡至【zhì】室温，所有标准品和样【yàng】品必需【xū】设【shè】置平【píng】行对【duì】照实验，快【kuài】速加入试剂至【zhì】样品【pǐn】中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实【shí】验键盘【pán】纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一【yī】起【qǐ】放回【huí】密封塑料【liào】袋，密【mì】封【fēng】，4℃保【bǎo】存。

2. 移取50μL中和液【yè】至各【gè】个微孔中，除了TA（全【quán】活性【xìng】）孔和Blank（空白）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非【fēi】特【tè】异结合)孔和B0孔【kǒng】（0 pmol/mL cAMP标准品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至【zhì】NSB（非特异【yì】结合【hé】）孔。

7. 移取50μL 偶【ǒu】联酶至各孔【kǒng】中，除了TA（全活性）孔和Blank（空白【bái】）孔。

8. 移取50μL 抗【kàng】体工作液至【zhì】各孔中，除了TA（全【quán】活性）孔、Blank（空白）孔【kǒng】和NSB（非特异【yì】结合）孔。

9. 将酶标孔置于孔板振【zhèn】动器上，250~500rpm，室【shì】温孵育2小【xiǎo】时。

10. 在吸水【shuǐ】纸【zhǐ】上拍干【gàn】微孔内溶【róng】液，加洗涤液400μL每孔【kǒng】洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微【wēi】孔，在干净的无【wú】尘吸水纸上轻巧酶【méi】标板【bǎn】数次，以【yǐ】确保【bǎo】没有洗涤【dí】液残【cán】留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物溶液，于【yú】室温静置5~30分【fèn】钟。（显【xiǎn】色底物A和【hé】B需在临用前15分钟内等体积混【hún】合【hé】，并避光【guāng】放置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标仪【yí】Blank（空白）孔值【zhí】，读取【qǔ】450nm处的光【guāng】密度值，在【zài】570nm至590nm之间好【hǎo】有修正，如果【guǒ】酶标仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除【chú】每【měi】个读数的Blank（空白）孔光密【mì】度【dù】值。

注意事项：

1. 用户在初次使用试剂盒时【shí】，应将各种试剂管【guǎn】离心数分钟【zhōng】，以便【biàn】试剂集中【zhōng】到【dào】管底。

2. 每次【cì】实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加【jiā】任何试剂【jì】，只【zhī】是zui后加底物溶液及【jí】2N H2SO4，测量【liàng】时先用此孔调OD值【zhí】至零。

3. 为防【fáng】止样品蒸【zhēng】发【fā】，试【shì】验时将反应板放于铺有湿布的密闭【bì】盒内，酶【méi】标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完的酶标板或【huò】者试剂，请于9-23℃保存，标准品、生【shēng】物【wù】-素标记抗体【tǐ】工作液【yè】、辣根过氧【yǎng】化【huà】物酶标【biāo】记亲和素工作液请【qǐng】依【yī】据所需的量配置使用，请勿重复使用【yòng】已稀【xī】释过的标准品、生【shēng】物-素标【biāo】记抗体【tǐ】工作【zuò】液或、辣【là】根过氧【yǎng】化物酶【méi】标记亲和【hé】素工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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