大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12
细胞介绍：
该细胞系来【lái】自能移植的雄【xióng】性大鼠肾上【shàng】腺嗜铬细胞瘤。这些细胞表【biǎo】达神经【jīng】生【shēng】长因子(NGF)受体。NGF可诱【yòu】导产生【shēng】神【shén】经表型【xíng】。这些细胞不合成【chéng】肾上腺素。
  
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，85%;马血【xuè】清 10%胎牛【niú】血清5%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存【cún】。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃【huǎng】解【jiě】冻，入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所有【yǒu】细胞悬【xuán】液加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天【tiān】换液【yè】并检
查细胞密度。
细胞传【chuán】代【dài】：如果细胞密【mì】度达80%-90%，即可进行传代培养。对【duì】于贴壁【bì】细胞，传代【dài】可参考以下方法：弃去培【péi】养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细【xì】胞大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加【jiā】少量培养基【jī】终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸【xī】出【chū】，在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀【yún】。
将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中【zhōng】或者瓶中【zhōng】。细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可【kě】进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时【shí】，弃去培养【yǎng】基后加入少量胰酶【méi】，细【xì】胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清的培养基后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
  
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12注意事项：
收到细【xì】胞后，若发【fā】现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞【bāo】有污染，请即与我们【men】电联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜【qián】在的【de】生物危害【hài】性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有【yǒu】废液【yè】及接触【chù】过此细胞的器皿需要灭菌后方能【néng】丢【diū】弃。
  
细胞特性：
1)来源：肾上腺嗜铬细胞瘤
2)形态：多角形
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（髙分化）PC-12运输和【hé】保【bǎo】存：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细【xì】胞后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使用【yòng】的【de】培养基后转移【yí】至【zhì】l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养瓶【píng】中【zhōng】培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操【cāo】作见【jiàn】细胞【bāo】培养步骤。细胞用途：仅供【gòng】使用【yòng】。