大鼠GSK3β ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠GSK3β ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前【qián】将各种【zhǒng】试剂取出放置30分钟，平【píng】衡至室温【wēn】，所有标准品和样【yàng】品必需设置平行【háng】对照【zhào】实验，快速【sù】加入试剂【jì】至样品中【zhōng】，立即漩涡震【zhèn】荡2秒混匀。

1. 依据【jù】实验键盘纸决定【dìng】酶标【biāo】条的使用【yòng】量，将【jiāng】剩余的酶【méi】标【biāo】条连【lián】同干燥剂一【yī】起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各【gè】个微孔中，除了TA（全活性）孔和【hé】Blank（空白）孔【kǒng】。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异【yì】结【jié】合)孔【kǒng】和B0孔（0 pmol/mL cAMP标【biāo】准品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至【zhì】NSB（非特【tè】异结合）孔。

7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA（全活性）孔【kǒng】和【hé】Blank（空【kōng】白【bái】）孔。

8. 移取【qǔ】50μL 抗体工作液至各【gè】孔【kǒng】中【zhōng】，除了TA（全【quán】活性）孔、Blank（空白）孔和NSB（非特异结合）孔。

9. 将酶标孔置【zhì】于孔板【bǎn】振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸【xī】水纸上拍干微孔内溶液，加【jiā】洗涤液400μL每孔【kǒng】洗3次，每次需【xū】拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微【wēi】孔【kǒng】，在干【gàn】净的无尘吸水纸【zhǐ】上轻巧【qiǎo】酶标板数次，以【yǐ】确保没有【yǒu】洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每【měi】孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分【fèn】钟。（显【xiǎn】色底物A和【hé】B需【xū】在【zài】临用前15分钟内【nèi】等体积混合【hé】，并避【bì】光放【fàng】置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清【qīng】除酶标仪Blank（空白【bái】）孔值，读取450nm处【chù】的光密度值，在【zài】570nm至【zhì】590nm之间好有修正，如果酶标【biāo】仪不【bú】能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank（空白）孔光【guāng】密【mì】度值。

注意事项：

1. 用户在【zài】初次使用试【shì】剂盒【hé】时，应将【jiāng】各种试剂管离心数分钟，以便试剂【jì】集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底【dǐ】物【wù】溶液及2N H2SO4，测【cè】量【liàng】时先用此【cǐ】孔调【diào】OD值至零【líng】。

3. 为防止样品【pǐn】蒸发，试验时将反应板放于铺【pù】有湿【shī】布的密【mì】闭【bì】盒内，酶标板加上盖【gài】或覆【fù】膜。

4. 未使用完的酶标【biāo】板或者试剂，请于9-23℃保【bǎo】存，标准品【pǐn】、生【shēng】物-素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记【jì】亲和素工作液请依据所需的量配置使用【yòng】，请勿重【chóng】复使用已稀释【shì】过【guò】的标准品、生【shēng】物-素标记抗体工作【zuò】液【yè】或、辣根过氧化【huà】物【wù】酶标【biāo】记亲和素【sù】工作液【yè】。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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