大鼠Nestin ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠Nestin ELISA试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前将各种试剂【jì】取【qǔ】出放置30分钟，平衡至室温，所【suǒ】有标准品和【hé】样品【pǐn】必需设【shè】置【zhì】平行对照【zhào】实验，快速加入试【shì】剂至样【yàng】品中，立即【jí】漩【xuán】涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验【yàn】键盘纸决定酶【méi】标条的使用量，将剩【shèng】余的酶标条连同【tóng】干燥剂一起放回【huí】密封【fēng】塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和【hé】液至各个微孔中，除【chú】了TA（全活性）孔和【hé】Blank（空白【bái】）孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结【jié】合)孔和【hé】B0孔（0 pmol/mL cAMP标准品【pǐn】）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移【yí】取50μL 0.1M HCl至NSB（非特异结合）孔【kǒng】。

7. 移取50μL 偶联酶至【zhì】各孔中，除【chú】了TA（全活性）孔【kǒng】和Blank（空白【bái】）孔【kǒng】。

8. 移取50μL 抗体工【gōng】作液至【zhì】各孔中，除了【le】TA（全【quán】活性）孔、Blank（空白）孔和NSB（非特异【yì】结合）孔。

9. 将酶【méi】标孔置【zhì】于【yú】孔板振动【dòng】器上，250~500rpm，室温【wēn】孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内【nèi】溶液，加洗涤液400μL每孔洗【xǐ】3次，每【měi】次【cì】需拍干。

11. 后一次【cì】洗涤，清空各微孔，在干净【jìng】的无尘吸水【shuǐ】纸上轻巧【qiǎo】酶标板数次【cì】，以确保没有洗涤液【yè】残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显【xiǎn】色底物【wù】溶液【yè】，于【yú】室温静置5~30分钟。（显色底【dǐ】物A和B需在临用【yòng】前15分钟内等体积混【hún】合，并避光放置【zhì】）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标仪Blank（空白）孔值，读【dú】取450nm处的光【guāng】密度值，在570nm至590nm之间好有修正，如果酶标仪不能自动清除【chú】Blank(空白)孔值，那么手动【dòng】扣【kòu】除每个【gè】读【dú】数的Blank（空【kōng】白）孔光密度【dù】值。

注意事项：

1. 用【yòng】户在初次使用试剂盒时，应将各种【zhǒng】试剂管离心【xīn】数【shù】分钟，以便试剂集中到管底【dǐ】。

2. 每次【cì】实验留一【yī】孔【kǒng】作为空白调零孔【kǒng】，该孔不加任何试剂，只【zhī】是zui后加底物溶液及2N H2SO4，测量【liàng】时先用此孔【kǒng】调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发，试验【yàn】时将反应板【bǎn】放【fàng】于铺有【yǒu】湿【shī】布的【de】密闭盒内，酶标板加【jiā】上盖或覆膜。

4. 未使用完【wán】的酶标板或者试剂，请于【yú】9-23℃保【bǎo】存，标【biāo】准品、生【shēng】物-素【sù】标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲【qīn】和素工【gōng】作液请依据所需的量【liàng】配置使【shǐ】用，请勿重复使用【yòng】已稀释过的标准【zhǔn】品、生物-素标记抗体【tǐ】工【gōng】作液或、辣根过氧化物酶标【biāo】记亲和素工作液【yè】。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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