大鼠 NaKATPase 试剂盒（酶联免疫检测法）

中文名称：大鼠 NaKATPase 试剂盒（酶联免疫检测法）

产品规格：48T/96

产品存储：低温、避光保存

产品库存：现货供应

产品分类：酶联免疫试剂盒

产品用途：仅供检测，不得用于临床

发货方式：专门快递免费送货上门

实验步骤：

使用前将【jiāng】各种试剂取出【chū】放置【zhì】30分钟，平【píng】衡至室【shì】温，所有标准品和样品必需设置平【píng】行【háng】对照实验，快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡【dàng】2秒混【hún】匀【yún】。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条【tiáo】的使用量，将剩余的酶标条连同干【gàn】燥剂【jì】一起【qǐ】放【fàng】回【huí】密封塑料【liào】袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和【hé】液至各个微孔中【zhōng】，除了TA（全活性【xìng】）孔【kǒng】和Blank（空【kōng】白）孔。

3. 移取【qǔ】100μL 0.1M HCl至NSB(非【fēi】特异结【jié】合)孔和B0孔（0 pmol/mL cAMP标准品）。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB（非特异结【jié】合【hé】）孔【kǒng】。

7. 移取【qǔ】50μL 偶联酶至各【gè】孔【kǒng】中，除了TA（全【quán】活性）孔和Blank（空白【bái】）孔。

8. 移取50μL 抗体工作液至各【gè】孔【kǒng】中，除了TA（全活性）孔、Blank（空白）孔【kǒng】和NSB（非特【tè】异结合）孔。

9. 将酶标孔【kǒng】置于孔【kǒng】板振动器上，250~500rpm，室温【wēn】孵【fū】育2小时【shí】。

10. 在吸水纸上拍干【gàn】微孔内【nèi】溶液，加洗涤液400μL每孔【kǒng】洗3次，每【měi】次【cì】需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔【kǒng】，在干净【jìng】的无尘吸水纸上轻巧【qiǎo】酶标板数次，以【yǐ】确【què】保没有洗涤液【yè】残【cán】留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每【měi】孔200μL显色底物溶液，于【yú】室温【wēn】静置5~30分钟。（显色底物A和【hé】B需在【zài】临【lín】用前15分钟内等体积混合【hé】，并【bìng】避光放置）。

14. 每孔加入50μL终止液，终止后立即读数。

15. 清除酶标仪Blank（空【kōng】白）孔值，读【dú】取450nm处的光密【mì】度值【zhí】，在570nm至590nm之间好有修正，如果【guǒ】酶【méi】标仪【yí】不能自动清除Blank(空白)孔【kǒng】值，那么手动扣【kòu】除每个读数的Blank（空【kōng】白【bái】）孔光密度值。

注意事项：

1. 用【yòng】户在初次使用试剂【jì】盒时，应将各【gè】种【zhǒng】试剂【jì】管离心数分钟，以【yǐ】便试剂集中到【dào】管底。

2. 每次实【shí】验留一孔作为【wéi】空白调零【líng】孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及【jí】2N H2SO4，测【cè】量【liàng】时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的【de】密闭盒内，酶标板【bǎn】加【jiā】上【shàng】盖或【huò】覆膜【mó】。

4. 未使用完【wán】的酶标【biāo】板【bǎn】或者试剂【jì】，请于【yú】9-23℃保存，标【biāo】准品、生【shēng】物-素标记【jì】抗体工作液、辣根过【guò】氧化物酶标记亲和素工【gōng】作液请依据所需【xū】的量配置使用，请【qǐng】勿重复使【shǐ】用已稀释过的标准品【pǐn】、生物-素【sù】标记抗体工作液【yè】或【huò】、辣根【gēn】过氧化物酶标记亲和素工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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