美洲四棱线虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：美洲四棱线虫PCR检测试剂盒

英文名称：Tetrameres americanaPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，美洲四棱线虫PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异性取【qǔ】决【jué】于【yú】引物与模板DNA互补的程度。理论【lùn】上，只要知【zhī】道任【rèn】何【hé】一段模板DNA序列， 就【jiù】能按【àn】其设计互补的寡核苷酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引【yǐn】物应【yīng】遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增【zēng】跨【kuà】度： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件下可扩增长至【zhì】10kb的片【piàn】段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-21%为宜，G+C太【tài】少扩增效果不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异条带。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的嘌呤或【huò】嘧啶【dìng】核【hé】苷酸【suān】的成串排【pái】列【liè】。

④避免引【yǐn】物内部【bù】出现二级结构，避免两条引【yǐn】物间互【hù】补，特别是3'端的互补，否则会【huì】形成【chéng】引物【wù】二聚体，产生【shēng】非特异的【de】扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特别【bié】是末及倒数第【dì】二个碱基【jī】，应严格要求【qiú】配对【duì】，以避免因【yīn】末【mò】端碱基不配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引物【wù】中有或能加上合【hé】适的【de】酶切位点， 被扩增的【de】靶序【xù】列*有适宜【yí】的酶切位点， 这对酶【méi】切分析【xī】或分子克隆很有好处。

⑦引物的【de】特异性【xìng】：引物应与核酸序列【liè】数据【jù】库的【de】其它序列无明【míng】显同源性。

引物量【liàng】：每条【tiáo】引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量【liàng】产生【shēng】所需要的结果为好，引物浓度偏高会引【yǐn】起错【cuò】配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二【èr】聚体的机【jī】会。