耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒

英文【wén】名称【chēng】：VancomycinResistant Enterococcus(VRE)PCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品【pǐn】说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质【zhì】主要有五种即【jí】引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异【yì】性取决【jué】于引物与【yǔ】模板DNA互补的程【chéng】度【dù】。理论上【shàng】，只要知道【dào】任何【hé】一段模板DNA序【xù】列， 就能按其设计互补的【de】寡核苷酸链做引物，利【lì】用PCR就可将模板DNA在体【tǐ】外大量扩增。设计引物应遵循以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为【wéi】宜，特【tè】定条件下可扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太【tài】少扩【kuò】增效【xiào】果不佳【jiā】，G+C过多易出现非【fēi】特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免5个以上【shàng】的嘌【piào】呤或嘧啶核苷酸的【de】成【chéng】串排列。

④避免【miǎn】引物内部出现二级结【jié】构，避免两【liǎng】条引物【wù】间互补，特别是3'端的【de】互补，否则会形成引物二聚【jù】体【tǐ】，产生非特异的扩增【zēng】条带【dài】。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特别是【shì】末【mò】及倒【dǎo】数【shù】第二个【gè】碱基，应严格要求配对，以避免因末端【duān】碱基不配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能【néng】加上合【hé】适【shì】的酶切【qiē】位点， 被扩增的靶序列*有适【shì】宜【yí】的酶【méi】切位点， 这对酶切分析【xī】或【huò】分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据【jù】库的其【qí】它序列无【wú】明显同源【yuán】性【xìng】。

引物量【liàng】：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所【suǒ】需【xū】要的【de】结果【guǒ】为【wéi】好，引物浓度偏高会引起错配和【hé】非【fēi】特【tè】异性扩增，且可增【zēng】加引物之间【jiān】形成二聚体的机会。