弓形杆菌属通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：弓形杆菌属通用PCR检测试剂盒

英文名称：Arcobacter spp.PCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液【yè】（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主要【yào】有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，弓形杆菌属通用PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特【tè】异性取决于引物【wù】与模板DNA互补【bǔ】的程度。理【lǐ】论上，只【zhī】要知道任何一段模板DNA序【xù】列， 就能按其设计【jì】互补的【de】寡核苷酸链做【zuò】引物，利用PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物【wù】应遵循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可【kě】扩增【zēng】长至【zhì】10kb的片【piàn】段。

③引物【wù】碱基【jī】：G+C含量以【yǐ】9-21%为宜，G+C太少扩增效果不佳【jiā】，G+C过多易出现【xiàn】非特异条带【dài】。ATGC*随机分布，避免5个以上【shàng】的嘌【piào】呤或嘧啶核【hé】苷酸的成【chéng】串排列。

④避【bì】免引物内部出现二级结构，避免【miǎn】两条引【yǐn】物间【jiān】互【hù】补【bǔ】，特【tè】别是3'端的互补【bǔ】，否则【zé】会形【xíng】成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的【de】碱基，特别是末及【jí】倒数第二个碱基，应【yīng】严格要【yào】求配对，以避免因末端【duān】碱基不配【pèi】对而【ér】导致PCR失败【bài】。

⑥引物【wù】中【zhōng】有或能加上【shàng】合适的酶切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有适宜的酶切位点， 这【zhè】对酶切分【fèn】析或【huò】分子克隆很有好【hǎo】处。

⑦引物的特【tè】异性：引物【wù】应与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列无【wú】明显同源性。

引物量：每条【tiáo】引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要【yào】的结果【guǒ】为好，引【yǐn】物浓度偏【piān】高会引起【qǐ】错配和非特异性【xìng】扩增，且可增加【jiā】引物之间形成二聚【jù】体的机会。