产品时间:2024-9-21
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产品介绍:
产品名称:假结核棒杆菌PCR检测试剂盒
英文【wén】名称:Corynebacterium pseudotuberculosisPCR
准备物品:
清【qīng】理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升【shēng】
稀释液(C) 毫【háo】升
溶【róng】解液(tD) 毫升
产【chǎn】品说明书 1份【fèn】
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加【jiā】PCR反应的物质主要有【yǒu】五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,假结核棒杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补【bǔ】的程【chéng】度。理【lǐ】论上,只要【yào】知【zhī】道任何一段模板DNA序【xù】列, 就【jiù】能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就【jiù】可将【jiāng】模板【bǎn】DNA在体外大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应遵循【xún】以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物【wù】扩增跨度: 以200-500bp为【wéi】宜,特定【dìng】条件下可扩增长至10kb的片段【duàn】。
③引物碱基:G+C含量以9-21%为宜,G+C太少扩【kuò】增效【xiào】果【guǒ】不【bú】佳【jiā】,G+C过多易出现【xiàn】非【fēi】特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上【shàng】的嘌【piào】呤或嘧【mì】啶核【hé】苷酸的成串排列。
④避免引【yǐn】物内部出现二级结构【gòu】,避【bì】免两条引物间互【hù】补,特别是3'端的互补,否【fǒu】则会形成引【yǐn】物二聚体,产生非特【tè】异的【de】扩增条【tiáo】带。
⑤引【yǐn】物3'端的碱基,特【tè】别是末及倒数【shù】第二个【gè】碱基,应严格要求配对,以避免【miǎn】因末端碱【jiǎn】基不【bú】配对【duì】而导致PCR失【shī】败。
⑥引物中有或能【néng】加上合【hé】适【shì】的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜【yí】的酶切位【wèi】点, 这【zhè】对酶【méi】切分析或分子克【kè】隆很【hěn】有好【hǎo】处。
⑦引物的特异性:引【yǐn】物应与核【hé】酸【suān】序列【liè】数据库的【de】其它序列无明显同源性。
引物量:每条【tiáo】引物【wù】的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引【yǐn】物量【liàng】产生【shēng】所需【xū】要【yào】的结果为好,引【yǐn】物浓度【dù】偏高会引起错【cuò】配和非特异性扩【kuò】增【zēng】,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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