环孢子虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：环孢子虫PCR检测试剂盒

英【yīng】文【wén】名称：Cyclospora cayetanensis PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的【de】物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，环孢子虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决【jué】于引物【wù】与模板【bǎn】DNA互【hù】补的程度。理论【lùn】上，只要知道【dào】任何一段模板DNA序列， 就【jiù】能按其【qí】设计互补的寡核【hé】苷酸链做引物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体【tǐ】外大量扩增。设计引物应遵【zūn】循以下【xià】原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件【jiàn】下可【kě】扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以【yǐ】9-19%为宜，G+C太少扩增【zēng】效果不佳，G+C过多易出【chū】现非特异【yì】条带【dài】。ATGC*随机分布【bù】，避【bì】免5个【gè】以上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷酸的【de】成串排列。

④避免引物内部出现二【èr】级【jí】结构，避免两条【tiáo】引物间互补，特别【bié】是3'端的互【hù】补，否则会形成【chéng】引【yǐn】物二【èr】聚体，产生非特【tè】异的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端【duān】的碱【jiǎn】基，特别是末及倒数第二个碱基【jī】，应严格【gé】要求配对，以【yǐ】避【bì】免因末端碱基不配对而导【dǎo】致PCR失败。

⑥引【yǐn】物中有或能加上【shàng】合适的酶【méi】切位点， 被扩增的靶序列*有适【shì】宜【yí】的酶【méi】切位【wèi】点， 这【zhè】对酶切分析或分子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物的【de】特异性：引物【wù】应与核酸序列数据库【kù】的其它【tā】序列无明显同【tóng】源性。

引物量：每条引物的浓【nóng】度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓【nóng】度【dù】偏高会引【yǐn】起错【cuò】配和非特异性扩增，且可增加引物之【zhī】间形【xíng】成二聚体的【de】机会【huì】。