化脓放线菌PCR检测试剂盒

产品信息：

产品名称：化脓放线菌PCR检测试剂盒

英文名称：Actinomyces pyogenesPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染【rǎn】色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物【wù】质主要有五【wǔ】种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，化脓放线菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决于【yú】引【yǐn】物【wù】与模板DNA互补的程度。理论上，只【zhī】要知道任何一【yī】段模板DNA序列， 就【jiù】能按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物，利用【yòng】PCR就可将模板【bǎn】DNA在体外大量扩【kuò】增。设计引【yǐn】物【wù】应【yīng】遵循以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩【kuò】增跨度： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可扩增长至【zhì】10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以9-19%为宜【yí】，G+C太少扩增【zēng】效果不佳，G+C过【guò】多【duō】易出现非【fēi】特【tè】异【yì】条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧【mì】啶核苷酸的【de】成串【chuàn】排列【liè】。

④避免【miǎn】引物内部【bù】出现二级结【jié】构，避【bì】免两条引【yǐn】物间互补，特别是3'端的互补【bǔ】，否则会形成引物二聚体，产生【shēng】非特异【yì】的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱【jiǎn】基，特别【bié】是末及倒数第【dì】二个碱基，应严格要求配【pèi】对，以避免因末端碱基不【bú】配对而导致PCR失败【bài】。

⑥引物【wù】中有或能加【jiā】上合适的【de】酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶序列*有适宜的【de】酶切位【wèi】点【diǎn】， 这对酶切分析或【huò】分子克隆很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物【wù】应与核酸【suān】序列数据库【kù】的【de】其它序列无明【míng】显同源性。

引物量【liàng】：每条引【yǐn】物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所需要【yào】的结果为好，引物浓【nóng】度偏高会引【yǐn】起错【cuò】配和非特异性扩【kuò】增，且可增加引物之间形成二聚体【tǐ】的机会。