蜂房小甲虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：蜂房小甲虫PCR检测试剂盒

英文名称：Aethina tumidaPCR

准备物品：

清【qīng】理液【yè】（A）                                   毫升

染【rǎn】色【sè】液（t B）                                 微升

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶【róng】解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质【zhì】主要有五【wǔ】种即【jí】引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，蜂房小甲虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于【yú】引物与模板DNA互补的【de】程度。理论上，只【zhī】要【yào】知道【dào】任何一段【duàn】模板DNA序【xù】列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引【yǐn】物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体外大【dà】量【liàng】扩【kuò】增。设【shè】计引物【wù】应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条件【jiàn】下可扩增长至【zhì】10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基【jī】：G+C含【hán】量以9-20%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出现非【fēi】特异条带。ATGC*随机分布【bù】，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸【suān】的成【chéng】串排列【liè】。

④避【bì】免引【yǐn】物内部【bù】出现二级【jí】结构，避免两条引物【wù】间互补，特别是3'端的互补，否则会【huì】形成引物二聚体，产生【shēng】非特异【yì】的扩增条【tiáo】带。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是末及倒数【shù】第二个碱基，应严格要求【qiú】配对，以【yǐ】避免【miǎn】因末端【duān】碱基【jī】不【bú】配对而导【dǎo】致PCR失败。

⑥引物中有或能【néng】加上合适的酶【méi】切位点， 被扩增的靶序列*有【yǒu】适宜的酶切位点【diǎn】， 这【zhè】对酶切【qiē】分【fèn】析【xī】或分子克【kè】隆很有好处。

⑦引【yǐn】物的特【tè】异性：引物应与核【hé】酸序列数据库的其它【tā】序列【liè】无【wú】明显同源性。

引【yǐn】物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生所需要【yào】的【de】结果为好，引物浓度偏高会引起【qǐ】错配【pèi】和非特异性【xìng】扩增【zēng】，且可【kě】增加引物【wù】之间形成二聚体的机会【huì】。