弗格森埃立克体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：弗格森埃立克体PCR检测试剂盒

英文名称：Ehrlichia fergusoniiPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染【rǎn】色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物质主【zhǔ】要【yào】有五种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，弗格森埃立克体PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特【tè】异性取决于引物与【yǔ】模板【bǎn】DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一【yī】段【duàn】模板DNA序列【liè】， 就能按其设计互补的【de】寡核【hé】苷酸链做引物，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在体外【wài】大量扩【kuò】增。设计引物应遵循【xún】以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件【jiàn】下可扩增【zēng】长【zhǎng】至10kb的片段【duàn】。

③引物碱基：G+C含量以9-20%为宜，G+C太少扩【kuò】增效【xiào】果不佳，G+C过多易出【chū】现非特异条【tiáo】带。ATGC*随机【jī】分布，避【bì】免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧啶【dìng】核苷酸【suān】的成串排列。

④避【bì】免引【yǐn】物内部出现二级结构【gòu】，避免两条【tiáo】引物间互补【bǔ】，特【tè】别是3'端的互补【bǔ】，否【fǒu】则会形成引物二聚体【tǐ】，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特【tè】别是末及倒数第二个【gè】碱基，应严格要求配对【duì】，以【yǐ】避【bì】免【miǎn】因【yīn】末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或【huò】能加上合适的酶切位【wèi】点， 被扩增【zēng】的靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点【diǎn】， 这【zhè】对酶切分析或分【fèn】子克隆很【hěn】有好处【chù】。

⑦引物的特【tè】异性：引物应与【yǔ】核酸序【xù】列数据库的其它序列【liè】无明显同【tóng】源性。

引物量：每条【tiáo】引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需要【yào】的结果【guǒ】为【wéi】好，引【yǐn】物浓【nóng】度偏高会引起错配和【hé】非特异性扩增，且可【kě】增加引物之间形成二聚体的机【jī】会。