粪产碱杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：粪产碱杆菌PCR检测试剂盒

英文名称：Alcaligenes faecalisPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主【zhǔ】要【yào】有【yǒu】五种即【jí】引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，粪产碱杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取【qǔ】决【jué】于引物与模【mó】板DNA互补的程度。理【lǐ】论上，只要知道任何一段模板DNA序列【liè】， 就能按其设【shè】计互【hù】补的寡核苷酸【suān】链做引【yǐn】物，利用PCR就【jiù】可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设【shè】计【jì】引物应遵【zūn】循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件【jiàn】下可扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引物碱基：G+C含量以9-20%为宜【yí】，G+C太少扩【kuò】增效果【guǒ】不佳，G+C过多易出现非特【tè】异条带。ATGC*随【suí】机【jī】分【fèn】布，避免5个【gè】以上的嘌呤或嘧【mì】啶核苷酸的【de】成串排列。

④避【bì】免引物内部出现二【èr】级结构，避免两条引【yǐn】物间互【hù】补，特别是3'端的互补，否则会形成【chéng】引物二聚体，产【chǎn】生非特异的扩【kuò】增条带【dài】。

⑤引物【wù】3'端【duān】的碱基，特别【bié】是末【mò】及【jí】倒数第二【èr】个碱基【jī】，应严格要求配对，以避免因末端碱基不【bú】配对而导致PCR失败。

⑥引【yǐn】物中【zhōng】有或能【néng】加【jiā】上合【hé】适【shì】的酶切位点， 被【bèi】扩【kuò】增的靶【bǎ】序列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物【wù】的特异性：引物【wù】应与核酸序列数【shù】据【jù】库的其【qí】它序列无明【míng】显同源性。

引物量：每【měi】条【tiáo】引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生所需要【yào】的【de】结【jié】果为好，引物浓【nóng】度偏高会引起错配和非特【tè】异性【xìng】扩增，且可增加引物之间形成【chéng】二聚【jù】体的机【jī】会。