粪肠球菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：粪肠球菌PCR检测试剂盒

英文名称：Enterococcus faecalis PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反【fǎn】应的物质主【zhǔ】要有五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，粪肠球菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于【yú】引物与模板DNA互补的程度。理【lǐ】论上，只要知道任何一段【duàn】模板DNA序列， 就【jiù】能按其设计【jì】互【hù】补【bǔ】的寡核苷酸链做引【yǐn】物【wù】，利用PCR就可将模板DNA在体外【wài】大【dà】量扩增。设计【jì】引物应遵循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特定条件【jiàn】下可【kě】扩增长至10kb的【de】片段。

③引【yǐn】物碱【jiǎn】基：G+C含量以【yǐ】9-20%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效果不【bú】佳，G+C过【guò】多易出现非【fēi】特【tè】异【yì】条带。ATGC*随机分布，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避【bì】免引物内部出现二级结【jié】构【gòu】，避免【miǎn】两条引物间互补【bǔ】，特别是3'端【duān】的互补，否则会形成引物二聚体，产生【shēng】非【fēi】特异的扩增条【tiáo】带。

⑤引物【wù】3'端的碱基，特别是末【mò】及倒数第【dì】二个碱基【jī】，应【yīng】严格要求配对，以避免【miǎn】因末【mò】端碱基不【bú】配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或能加上合【hé】适的酶切【qiē】位【wèi】点， 被扩增的靶序【xù】列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这【zhè】对酶切分析或分子克【kè】隆很有好处【chù】。

⑦引物的特异性：引物应【yīng】与核酸【suān】序列数据库的其它序【xù】列【liè】无明显【xiǎn】同源性。

引物【wù】量：每条【tiáo】引物的【de】浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需要的结果为好，引物浓度【dù】偏【piān】高【gāo】会引起错配和非特【tè】异性扩增，且可增加引物【wù】之间形成二聚体的机会。