分歧巴贝斯虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：分歧巴贝斯虫PCR检测试剂盒

英文名称：Babesia divergensPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染【rǎn】色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶【róng】解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书【shū】                                    1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主要【yào】有五【wǔ】种即引物【wù】、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，分歧巴贝斯虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于【yú】引【yǐn】物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论上，只【zhī】要【yào】知道任何一段模【mó】板DNA序列， 就能按其设计互补的【de】寡【guǎ】核苷酸链做引【yǐn】物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在【zài】体外大量【liàng】扩增【zēng】。设计引【yǐn】物应【yīng】遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可【kě】扩【kuò】增【zēng】长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含【hán】量以9-20%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免【miǎn】5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶核苷酸【suān】的【de】成串排【pái】列。

④避免引物内部出现二级结【jié】构，避免两条引物【wù】间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二【èr】聚【jù】体，产【chǎn】生【shēng】非【fēi】特【tè】异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及【jí】倒数第二【èr】个碱基【jī】，应严格要【yào】求配对，以避免因末端碱基【jī】不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有或能加上【shàng】合适的酶切【qiē】位点， 被扩【kuò】增的靶序【xù】列*有【yǒu】适宜的酶切位点， 这【zhè】对酶切分【fèn】析或分子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物【wù】的特异性：引物应与【yǔ】核酸序列数据【jù】库的其它【tā】序列无明【míng】显同源性。

引物量【liàng】：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产生所需要的结果【guǒ】为好，引物【wù】浓度偏【piān】高会【huì】引【yǐn】起错配和非特异性扩增，且【qiě】可增加引物之间【jiān】形【xíng】成【chéng】二聚体的机会。