放线共生放线杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：放线共生放线杆菌PCR检测试剂盒

英文名称【chēng】：Aggregatibacter actinomycetemcomitans PCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色【sè】液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品说明【míng】书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物质主要有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，放线共生放线杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异性取决于引物与模板【bǎn】DNA互补的程度。理【lǐ】论【lùn】上，只要知道任何【hé】一段模板【bǎn】DNA序【xù】列， 就【jiù】能按【àn】其设计互补的【de】寡核【hé】苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增【zēng】。设计引物【wù】应遵循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增【zēng】跨【kuà】度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件【jiàn】下可【kě】扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以9-20%为宜，G+C太【tài】少扩【kuò】增效果不佳，G+C过多易【yì】出现非特异【yì】条带。ATGC*随机分布【bù】，避免5个【gè】以上的嘌呤【lìng】或【huò】嘧啶核苷【gān】酸的成【chéng】串【chuàn】排【pái】列。

④避免引物内部出【chū】现二级结构【gòu】，避免两条引物间互补【bǔ】，特【tè】别是3'端的【de】互补，否则会形【xíng】成【chéng】引物二聚体，产生【shēng】非【fēi】特异的扩【kuò】增条带。

⑤引物3'端的碱基【jī】，特别【bié】是末及倒数【shù】第二个碱基，应严格要求【qiú】配对，以【yǐ】避免因末端【duān】碱基不配对而导【dǎo】致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有或能加上合适的【de】酶切位点， 被扩增的靶序【xù】列*有【yǒu】适宜的【de】酶切位点【diǎn】， 这对酶切分析或【huò】分子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物的特【tè】异性：引物应与核【hé】酸序列数据库的其【qí】它序列无明【míng】显同源性【xìng】。

引物量：每条引物【wù】的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所【suǒ】需【xū】要的结果【guǒ】为好【hǎo】，引物浓度偏高会【huì】引起【qǐ】错配和非特异性扩增，且可增加【jiā】引物之间形成二聚体的机【jī】会。