产品时间:2024-9-20
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产品信息:
产品名称:放线菌属通用PCR检测试剂盒
英文名称:Actinomyces spp.PCR
准备物品:
清理液【yè】(A) 毫升
染色液【yè】(t B) 微升
稀释【shì】液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品【pǐn】说明书【shū】 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主【zhǔ】要有五种即【jí】引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,放线菌属通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上【shàng】,只要知道任何【hé】一【yī】段模【mó】板【bǎn】DNA序列【liè】, 就能按其设计互补的寡核苷【gān】酸链做引物,利用PCR就可将模【mó】板DNA在体【tǐ】外大【dà】量【liàng】扩增。设【shè】计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨【kuà】度: 以200-500bp为宜,特定【dìng】条【tiáo】件下可扩【kuò】增长至10kb的片段【duàn】。
③引物碱【jiǎn】基【jī】:G+C含量以9-20%为宜,G+C太少扩增效【xiào】果不佳【jiā】,G+C过多易出【chū】现非特异条带。ATGC*随机分布,避免【miǎn】5个以上【shàng】的嘌呤或【huò】嘧啶核苷酸的成串排【pái】列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条【tiáo】引物【wù】间互补【bǔ】,特别【bié】是3'端的互补,否则会形成引物二聚【jù】体,产【chǎn】生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是【shì】末及【jí】倒数第二个【gè】碱基【jī】,应严格要求配对【duì】,以避【bì】免因末端碱基不【bú】配对而导致PCR失败。
⑥引物【wù】中有或【huò】能加上【shàng】合适的酶【méi】切位点, 被【bèi】扩增【zēng】的靶序列【liè】*有【yǒu】适宜的酶切位点【diǎn】, 这对酶切分析或分子克隆很有【yǒu】好处。
⑦引物【wù】的特【tè】异性:引物应与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列无明【míng】显同源【yuán】性。
引物量:每【měi】条引物的浓度【dù】0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量【liàng】产【chǎn】生所需要的结果为【wéi】好,引物浓度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩【kuò】增【zēng】,且【qiě】可【kě】增加引物【wù】之间形成二聚体的机会。
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