产品时间:2024-9-20
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产品介绍:
产品名称:反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒
英文名称:Ehrlichia ruminantiumPCR
准备物品:
清理液(A) 毫【háo】升
染色液(t B) 微升
稀【xī】释液(C) 毫升
溶解液【yè】(tD) 毫升
产品说【shuō】明书【shū】 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取决【jué】于引物与模【mó】板DNA互【hù】补的程【chéng】度【dù】。理论上,只要知道【dào】任何一段模板DNA序【xù】列, 就能【néng】按其设计互补【bǔ】的寡核苷【gān】酸【suān】链做引物,利用PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵【zūn】循【xún】以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩【kuò】增跨【kuà】度【dù】: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩【kuò】增长至10kb的片段。
③引物碱基【jī】:G+C含量以9-20%为【wéi】宜,G+C太【tài】少【shǎo】扩增效果【guǒ】不佳【jiā】,G+C过多【duō】易出【chū】现非特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布,避免5个以上【shàng】的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。
④避免引物内【nèi】部出现二级【jí】结构,避免两条引物【wù】间【jiān】互补,特【tè】别是3'端的互补【bǔ】,否则会形【xíng】成引物二【èr】聚体,产生非特异的扩增条带【dài】。
⑤引物3'端的碱【jiǎn】基,特别是末及倒【dǎo】数第二个碱基【jī】,应严【yán】格要【yào】求配对【duì】,以避【bì】免因末端碱基不配对【duì】而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加【jiā】上合适【shì】的【de】酶切位点, 被【bèi】扩增的【de】靶序列*有适宜的【de】酶【méi】切位点, 这对【duì】酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的【de】特异性:引物应【yīng】与核酸序【xù】列数据库的其【qí】它序列无明显【xiǎn】同源性【xìng】。
引物量:每【měi】条引物的【de】浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物【wù】量产生所【suǒ】需要【yào】的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性【xìng】扩【kuò】增,且可增加引物【wù】之间形成二聚【jù】体的【de】机会
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