产品时间:2024-9-19
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产品介绍:
产品名称:鹅裂口线虫PCR检测试剂盒
英文名称:Amidostomum anseriPCR
准备物品:
清理液(A) 毫【háo】升
染色【sè】液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升【shēng】
溶解液(tD) 毫升
产品说【shuō】明书 1份【fèn】
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参【cān】加PCR反应的物质【zhì】主要有【yǒu】五种即【jí】引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,鹅裂口线虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物【wù】与模板【bǎn】DNA互补的程【chéng】度。理论上,只【zhī】要【yào】知道任何一段模板DNA序列, 就【jiù】能按其【qí】设计互补的【de】寡核苷酸链做【zuò】引物,利用【yòng】PCR就可【kě】将模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应【yīng】遵【zūn】循以下原【yuán】则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引【yǐn】物扩增【zēng】跨度: 以200-500bp为宜,特【tè】定【dìng】条件下可扩【kuò】增长至10kb的片【piàn】段。
③引物碱基【jī】:G+C含量以9-19%为【wéi】宜,G+C太少扩增效果不佳【jiā】,G+C过多易出【chū】现【xiàn】非【fēi】特异条带。ATGC*随机【jī】分布【bù】,避免5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。
④避【bì】免引物内部出现二级结构,避免【miǎn】两条引物【wù】间互补,特别是【shì】3'端【duān】的互补,否则会形成【chéng】引物二聚体,产生非特异的扩增【zēng】条带。
⑤引物3'端的碱基,特【tè】别【bié】是末及倒数第二个碱基,应严【yán】格要【yào】求配对,以避免因【yīn】末端碱【jiǎn】基【jī】不配【pèi】对而导【dǎo】致PCR失败。
⑥引物中有【yǒu】或【huò】能加【jiā】上合【hé】适的酶切位点, 被扩增的【de】靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点, 这对酶切【qiē】分析【xī】或【huò】分子克隆很有好处【chù】。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序【xù】列数据【jù】库的其【qí】它【tā】序列无明显同【tóng】源性【xìng】。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物【wù】量产生所【suǒ】需要的结果为好,引【yǐn】物浓【nóng】度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩增,且可增【zēng】加引【yǐn】物【wù】之【zhī】间形成二聚【jù】体的机会。
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