多里病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：多里病毒PCR检测试剂盒

英文名称：Dhori VirusRTPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说【shuō】明书                                      1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，多里病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取决于引物与模板DNA互补的程【chéng】度。理论上，只【zhī】要知道任何一【yī】段【duàn】模板DNA序列【liè】， 就能按其设计互【hù】补的寡核【hé】苷酸链【liàn】做引【yǐn】物，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在【zài】体外大量扩增。设计引【yǐn】物【wù】应【yīng】遵循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段【duàn】。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以9-22%为宜，G+C太少【shǎo】扩增效果不佳，G+C过多易【yì】出现非特【tè】异条带。ATGC*随机分布，避【bì】免5个【gè】以上【shàng】的嘌呤【lìng】或嘧啶核【hé】苷酸【suān】的成【chéng】串排列。

④避免引物内部【bù】出现二级结构【gòu】，避免【miǎn】两条引【yǐn】物间互【hù】补，特别是3'端【duān】的互补【bǔ】，否则会形成引【yǐn】物【wù】二聚体，产生非特异的扩增【zēng】条带。

⑤引物3'端的碱【jiǎn】基，特别【bié】是末及倒数第【dì】二【èr】个碱【jiǎn】基，应【yīng】严【yán】格要求配对，以避免因末端【duān】碱基不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶序【xù】列*有适宜【yí】的酶【méi】切位点， 这对酶切分析或分【fèn】子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物的特【tè】异性：引物应与核【hé】酸【suān】序列数【shù】据库的其它序列无明【míng】显同【tóng】源性。

引物量：每【měi】条引【yǐn】物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引【yǐn】物浓度偏【piān】高会引起错配和非特【tè】异性扩增，且【qiě】可增加引物之间【jiān】形【xíng】成二【èr】聚体的机【jī】会。