对虾杆状病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：对虾杆状病毒PCR检测试剂盒

英文名称：Baculovirus Penaei(BP)PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品【pǐn】说明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物【wù】质主要【yào】有【yǒu】五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，对虾杆状病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于【yú】引【yǐn】物与模板DNA互【hù】补的程度。理论上【shàng】，只【zhī】要知【zhī】道【dào】任何一段模板【bǎn】DNA序列， 就能按其设计互补【bǔ】的【de】寡核苷酸链做引物，利【lì】用PCR就可将模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应【yīng】遵循以【yǐ】下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件【jiàn】下可扩增【zēng】长至【zhì】10kb的片段。

③引【yǐn】物碱【jiǎn】基：G+C含量以【yǐ】9-22%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异【yì】条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或【huò】嘧啶核【hé】苷酸的【de】成串【chuàn】排【pái】列。

④避免引【yǐn】物内部出现二级【jí】结构，避免两【liǎng】条引【yǐn】物间互补，特别【bié】是3'端的【de】互补，否则会【huì】形成引物二聚体，产【chǎn】生非特异的扩增条带【dài】。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及【jí】倒数第【dì】二个碱基，应【yīng】严格要求配对，以避【bì】免【miǎn】因末【mò】端碱基不配【pèi】对而导【dǎo】致【zhì】PCR失败。

⑥引物中有或能加上合【hé】适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适【shì】宜的酶切位点， 这【zhè】对酶切【qiē】分析或【huò】分子克隆【lóng】很有【yǒu】好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物【wù】应与核酸序列【liè】数据库的其【qí】它序列【liè】无【wú】明显同源性。

引物量【liàng】：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓【nóng】度【dù】偏高会【huì】引起错配【pèi】和非【fēi】特【tè】异性扩增，且【qiě】可增【zēng】加引物之间形成二聚【jù】体的【de】机会【huì】。