产品时间:2024-9-21
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产品介绍:
产品名称:登革病毒通用PCR检测试剂盒
英文名称:Dengue Virus(DENV)RTPCR
准备物品:
清【qīng】理液(A) 毫升
色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液【yè】(tD) 毫升
产品说明书【shū】 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加【jiā】PCR反应的【de】物质【zhì】主要有五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,登革病毒通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决【jué】于引物【wù】与模板【bǎn】DNA互补的程度。理【lǐ】论【lùn】上【shàng】,只要知道任何一段【duàn】模【mó】板DNA序列, 就能按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物,利用PCR就【jiù】可将模板DNA在【zài】体【tǐ】外大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应遵【zūn】循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨【kuà】度: 以200-500bp为宜,特定条【tiáo】件【jiàn】下可扩增长至10kb的【de】片【piàn】段。
③引【yǐn】物碱基:G+C含量以9-21%为【wéi】宜【yí】,G+C太少扩增效【xiào】果【guǒ】不佳【jiā】,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以【yǐ】上的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级【jí】结构,避免两条引【yǐn】物间【jiān】互补,特别是3'端【duān】的互补,否【fǒu】则会【huì】形成引【yǐn】物二【èr】聚体,产生【shēng】非特【tè】异的扩增条带。
⑤引物【wù】3'端的【de】碱基,特【tè】别是末及倒数第【dì】二个碱【jiǎn】基,应严格要【yào】求配对【duì】,以避免因末端碱基【jī】不配【pèi】对而导致PCR失败。
⑥引物【wù】中【zhōng】有或能加上合适的酶【méi】切位【wèi】点, 被扩增的靶【bǎ】序列*有【yǒu】适宜的【de】酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有【yǒu】好处。
⑦引物的特异性:引【yǐn】物【wù】应与核酸序列数据库的其【qí】它序列【liè】无明【míng】显同源性。
引物【wù】量:每条引物的浓度0.1~1umol或【huò】10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为【wéi】好,引物浓【nóng】度偏【piān】高会引【yǐn】起错配和非【fēi】特异性【xìng】扩【kuò】增【zēng】,且可增加引【yǐn】物之间形成二【èr】聚体的机会。
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