地衣形芽孢杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：地衣形芽孢杆菌PCR检测试剂盒

英文名称：Bacillus licheniformisPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升【shēng】

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液【yè】（C）                                   毫升【shēng】

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说明【míng】书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要【yào】有【yǒu】五种即引物【wù】、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，地衣形芽孢杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性取决【jué】于引物与【yǔ】模板DNA互【hù】补的程【chéng】度。理论【lùn】上，只要知道【dào】任何一段模板DNA序列， 就能按【àn】其设计互【hù】补的寡核苷酸链【liàn】做引【yǐn】物【wù】，利用PCR就可【kě】将模【mó】板DNA在体外大量扩增。设计引【yǐn】物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引物【wù】碱【jiǎn】基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出【chū】现非【fēi】特异条带。ATGC*随【suí】机分布，避【bì】免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出【chū】现二级【jí】结构，避免两条【tiáo】引物间【jiān】互补，特【tè】别是【shì】3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生【shēng】非特【tè】异的【de】扩增【zēng】条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基【jī】，特别是末及【jí】倒数第二个碱基，应严格要求【qiú】配【pèi】对，以避免因末端【duān】碱基不【bú】配对而【ér】导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上【shàng】合【hé】适的酶切位【wèi】点， 被扩【kuò】增【zēng】的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对【duì】酶切分析或分子【zǐ】克【kè】隆很有好处。

⑦引物的特异【yì】性：引物【wù】应与【yǔ】核酸序【xù】列数据库的其【qí】它【tā】序列无明显同源性。

引物量：每条引【yǐn】物的浓【nóng】度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所需要的结果为好，引【yǐn】物浓【nóng】度偏高会引起错【cuò】配和【hé】非特异性扩增，且可增加引物之间形【xíng】成二聚体【tǐ】的机会。