产品时间:2024-9-21
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产品介绍:
产品名称:马疱疹病毒3型PCR检测试剂盒
英文名【míng】称:Equine Herpesvirus 3 (EHV3)3PCR
准备物品:
清理【lǐ】液(A) 毫升
染色液(t B) 微【wēi】升
稀释液(C) 毫【háo】升
溶【róng】解【jiě】液(tD) 毫升
产【chǎn】品说明【míng】书 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加PCR反【fǎn】应的【de】物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,马疱疹病毒3型PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取【qǔ】决于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计【jì】互补的寡【guǎ】核苷酸链做引【yǐn】物【wù】,利用【yòng】PCR就【jiù】可【kě】将模板【bǎn】DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物应遵循以下原【yuán】则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物【wù】扩增跨度【dù】: 以200-500bp为宜,特定条件【jiàn】下可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片段。
③引【yǐn】物【wù】碱【jiǎn】基:G+C含量以9-21%为【wéi】宜,G+C太少扩增效【xiào】果不佳,G+C过多易【yì】出现非特异条【tiáo】带【dài】。ATGC*随【suí】机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。
④避免引【yǐn】物【wù】内部出现二级结【jié】构,避免两条引【yǐn】物【wù】间互补,特别【bié】是3'端的互补【bǔ】,否则会形成引物【wù】二聚体,产【chǎn】生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱【jiǎn】基,特别是末及倒数第二个【gè】碱【jiǎn】基,应严【yán】格要求【qiú】配对,以避免【miǎn】因末【mò】端碱基不配对而导致PCR失败【bài】。
⑥引物【wù】中有或能加上合适的酶【méi】切【qiē】位点【diǎn】, 被扩增的靶序列*有适宜的酶【méi】切【qiē】位点【diǎn】, 这对酶切【qiē】分析或【huò】分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性【xìng】:引【yǐn】物应【yīng】与核酸序【xù】列数据库【kù】的其它【tā】序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要【yào】的结果【guǒ】为好,引物浓度偏高会【huì】引【yǐn】起错配和非【fēi】特异性扩增【zēng】,且可增加【jiā】引物之间【jiān】形成【chéng】二【èr】聚体的机【jī】会。
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