马疱疹病毒1型PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：马疱疹病毒1型PCR检测试剂盒

英文【wén】名称：Equine Herpesvirus 1 (EHV1)1PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有【yǒu】五种即引【yǐn】物、酶【méi】、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，马疱疹病毒1型PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决【jué】于引物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论上【shàng】，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的寡核【hé】苷酸链【liàn】做引物，利【lì】用PCR就可将模板DNA在【zài】体【tǐ】外大量扩增。设【shè】计引物应【yīng】遵【zūn】循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度【dù】： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱【jiǎn】基：G+C含【hán】量以9-21%为宜，G+C太少扩增【zēng】效果不【bú】佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧啶【dìng】核苷酸的【de】成【chéng】串排列。

④避免引【yǐn】物内【nèi】部出现二级结构，避免两【liǎng】条【tiáo】引物【wù】间互补【bǔ】，特别【bié】是3'端的互补，否则会形成引物【wù】二聚体【tǐ】，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特别是【shì】末【mò】及倒数第二个碱基，应严格要求配对【duì】，以避免因末端碱【jiǎn】基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或【huò】能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有【yǒu】适【shì】宜的酶切位【wèi】点， 这对酶【méi】切【qiē】分析或【huò】分子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物【wù】的特【tè】异性：引【yǐn】物应与核【hé】酸序【xù】列【liè】数据库的其它序列无明显同源性。

引物量【liàng】：每条引物【wù】的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需要的结果为【wéi】好，引【yǐn】物浓【nóng】度偏高【gāo】会引【yǐn】起错配和非特异性【xìng】扩增，且【qiě】可增加引物之间形成二聚体的机会。