卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒

英文名称：Cladosporium carrioniiPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色【sè】液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产【chǎn】品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应【yīng】的物质主【zhǔ】要有五种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物【wù】与模【mó】板DNA互补【bǔ】的程度。理论上，只【zhī】要知道任何一段模板DNA序列【liè】， 就能【néng】按其设【shè】计互补的寡核【hé】苷酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在体【tǐ】外【wài】大量扩增【zēng】。设计引物应遵循以下原【yuán】则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增跨【kuà】度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特【tè】定【dìng】条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱【jiǎn】基：G+C含【hán】量以9-23%为宜，G+C太少【shǎo】扩【kuò】增【zēng】效果【guǒ】不佳，G+C过多易出现【xiàn】非【fēi】特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免【miǎn】引物内部出现二级结构，避免两条引【yǐn】物【wù】间互补，特【tè】别是3'端的【de】互【hù】补，否则会形成引【yǐn】物二聚体，产生【shēng】非特【tè】异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及【jí】倒数【shù】第二个【gè】碱基，应严格要求【qiú】配对，以【yǐ】避【bì】免因末端碱基不配对而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或【huò】能【néng】加上合适的酶切【qiē】位点， 被扩增的【de】靶序列*有适宜的【de】酶【méi】切位【wèi】点， 这对酶【méi】切分析或分子克隆很有好处。

⑦引【yǐn】物的特异【yì】性：引物应与核【hé】酸序【xù】列数据【jù】库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生【shēng】所需要【yào】的结果为好，引【yǐn】物浓度【dù】偏高会引起错配和非【fēi】特异性扩增，且可增【zēng】加【jiā】引【yǐn】物之间形成【chéng】二聚体的【de】机会。