抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR检测试剂盒

英文【wén】名称【chēng】：Carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae(RKp)PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫升

染【rǎn】色液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫【háo】升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主【zhǔ】要有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取【qǔ】决于引物【wù】与模【mó】板DNA互补的程度。理论上，只【zhī】要知道任何【hé】一段模板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可【kě】将模板DNA在体【tǐ】外【wài】大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应【yīng】遵循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条【tiáo】件下可扩增长至10kb的片【piàn】段【duàn】。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以9-23%为宜，G+C太少扩【kuò】增效果【guǒ】不佳【jiā】，G+C过【guò】多易出现非【fēi】特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以【yǐ】上的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸【suān】的成【chéng】串【chuàn】排列。

④避【bì】免【miǎn】引物【wù】内部出现二级结构，避免两条引物间互补【bǔ】，特别是【shì】3'端的互【hù】补，否则会形成引物二聚体【tǐ】，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特【tè】别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配【pèi】对，以避免因末端碱基不【bú】配对而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物【wù】中有或能加上合适的酶【méi】切位点， 被扩【kuò】增的【de】靶序列*有适宜的酶切位点【diǎn】， 这对酶切分析或分子【zǐ】克【kè】隆很【hěn】有好【hǎo】处。

⑦引物的特异性：引物应与【yǔ】核【hé】酸序列数据【jù】库的其它【tā】序列无明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量【liàng】产【chǎn】生所需【xū】要的结【jié】果为好【hǎo】，引物浓度【dù】偏高会引起错配和非特【tè】异性扩增，且可增加引物【wù】之间形成二【èr】聚体【tǐ】的机【jī】会。