柯萨奇病毒16型变种PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：柯萨奇病毒16型变种PCR检测试剂盒

英文【wén】名称：Coxsackie Virus(CA16v)A16RTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液【yè】（tD）                                  毫升【shēng】

产品说【shuō】明书                                      1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的【de】物质主【zhǔ】要有五种即引物【wù】、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，柯萨奇病毒16型变种PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于【yú】引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板【bǎn】DNA序列， 就【jiù】能按【àn】其设计互补的【de】寡核苷酸链做引物，利用【yòng】PCR就可【kě】将模板【bǎn】DNA在体外大量扩增。设计【jì】引物应遵【zūn】循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物【wù】扩增跨度： 以【yǐ】200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩【kuò】增长至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱【jiǎn】基：G+C含量以9-23%为宜，G+C太少扩【kuò】增效果不佳，G+C过多【duō】易出现【xiàn】非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免【miǎn】5个以上的嘌【piào】呤或嘧【mì】啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物内【nèi】部出现二【èr】级结构，避免两条引【yǐn】物间互【hù】补，特别是【shì】3'端的互补，否则会形成引物二聚体【tǐ】，产生非特异的扩【kuò】增【zēng】条【tiáo】带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及【jí】倒数第二【èr】个碱基，应严格【gé】要求配【pèi】对，以【yǐ】避免因末端碱基不配对而导致PCR失败【bài】。

⑥引【yǐn】物中有或【huò】能【néng】加上合【hé】适的酶切位点， 被【bèi】扩【kuò】增的【de】靶序列*有适宜的酶【méi】切位点， 这【zhè】对酶切分析或分子克隆很【hěn】有好处。

⑦引物的【de】特【tè】异性【xìng】：引物应与核酸序列【liè】数据库的【de】其它序列无明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的【de】浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生所【suǒ】需要的结果【guǒ】为好，引物浓度偏高会引起错配和【hé】非特异【yì】性【xìng】扩增【zēng】，且可增加引物之【zhī】间形成二聚【jù】体【tǐ】的机【jī】会。