小鼠足细胞（MPC-5）

小鼠足细胞(MPC-5)
细胞特性
1)来源：小鼠
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到细胞后，可在【zài】1000RPM，常【cháng】温条件下【xià】，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清【qīng】，加入推荐 使【shǐ】用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培【péi】养皿或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良【liáng】好时，再进行【háng】冻【dòng】存。具【jù】体操作见【jiàn】细【xì】胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠足细胞(MPC-5)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640培【péi】养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮酸【suān】钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度，培养箱 湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储【chǔ】存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加l-2mL培【péi】养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜（或将细胞【bāo】悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养【yǎng】基【jī】，培养过夜）。第二天换液并【bìng】检【jiǎn】 查细【xì】胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-20次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培
养箱【xiāng】中【zhōng】消【xiāo】化9-20分钟，然后在【zài】显微【wēi】镜下【xià】观察细【xì】胞消化情况，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后【hòu】加【jiā】少量培养基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养【yǎng】基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含【hán】8ml培养基的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态【tài】良【liáng】好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培【péi】养基后【hòu】加入少【shǎo】量胰酶，细胞变【biàn】圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中【zhōng】，再添【tiān】加1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻【dòng】存。
 
小鼠足细胞(MPC-5)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破【pò】损及细胞有【yǒu】污染，请【qǐng】立【lì】即与我们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞均【jun1】视为有潜在【zài】的生物危害【hài】性，必须在二【èr】级生物【wù】安全台内操作【zuò】，并请注意防护，所有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的器皿需【xū】要灭菌后方【fāng】能丢弃。