小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)
细胞介绍
与【yǔ】原【yuán】始的随机交配【pèi】3T3和近交系BALB/c 3T3建【jiàn】株【zhū】方法一样，NIH/3T3，是从MH Swiss小鼠胚胎培养【yǎng】物中建立的【de】高度接触抑制的连续细胞株。为【wéi】了培育【yù】在【zài】形【xíng】态学 特征上更适合于【yú】进行转化分析的亚株，建立的MH/3T3细【xì】胞株又【yòu】进行【háng】了五轮以上【shàng】亚【yà】克隆。这株细胞对DNA转化【huà】及转染【rǎn】研究十分【fèn】有【yǒu】用。检测表明肢骨发育畸形病 毒(鼠痘)阴【yīn】性。
 
细胞特性
1)来源：胚胎
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和【hé】保存【cún】：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞【bāo】后，可在【zài】1000RPM，常【cháng】温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清，加入推荐使用的培养【yǎng】基后转移至l〇cm培【péi】养皿或者【zhě】T25培养瓶【píng】中培养，传【chuán】代【dài】达【dá】到细胞生长状态良好时，再进行冻存【cún】。具【jù】体操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准【zhǔn】备DMEM培养基【jī】(DMEM，GIBCO)，北美胎牛血【xuè】清，15%，1% PS。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏【sū】细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解【jiě】冻，离心管加入4mL培养基【jī】混合均【jun1】匀。在800-1000RPM条件下离心9-20分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加【jiā】入T25培养瓶中【zhōng】 培养，补加培养基至【zhì】6ml。
2.细【xì】胞传代：如果细胞【bāo】密度达80%-90%，即【jí】可【kě】进【jìn】行传代培养。
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-20次。
力口【kǒu】 lm丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-20分钟，然后在显微镜下【xià】观察【chá】细胞消【xiāo】化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加2ml*培养基终止消化【huà】。
轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下【xià】离心5分钟，弃去【qù】上【shàng】清【qīng】液，加l-2mL 培养液后吹匀。
将细胞悬液按1:2到1:5比例【lì】分到新【xīn】的含6ml培养基的新皿中【zhōng】或者瓶【píng】中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去【qù】培养基【jī】后【hòu】，PBS清洗瓶底9-20次后加入【rù】lml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养【yǎng】基【jī】终止【zhǐ】消化，可【kě】使【shǐ】用血球计【jì】数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上【shàng】清。用血【xuè】清重【chóng】悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓【nóng】度【dù】为 10%。加入DMSO后迅速混匀【yún】，按每【měi】lml的数量分配到【dào】冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存。
将【jiāng】冻存【cún】管【guǎn】置于程序降温【wēn】盒【hé】中【zhōng】，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录【lù】冻存管位置以便下次拿取。
 
小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物细胞均【jun1】视【shì】为有潜在的生物【wù】危害性，必【bì】须在【zài】二级生物安全台内操作【zuò】，并请注意防护【hù】，所有废液及【jí】接【jiē】触过【guò】此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。