小鼠正常肝细胞（NCTC 1469）

小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)
细胞介绍
1952年建系，源【yuán】于正常C3H/An小鼠的肝脏【zāng】组【zǔ】织，表达H-2K抗原，鼠痘【dòu】病毒阴性。细胞【bāo】特性【xìng】
1)来源：小鼠的肝组织
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜【jìng】下确认【rèn】细胞生长状【zhuàng】态，去掉【diào】封口【kǒu】膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞长【zhǎng】满（90%以【yǐ】上）请及时【shí】进行细胞传代，传代【dài】培【péi】养用6ml本公司附 带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检【jiǎn】查细胞是【shì】否污染【rǎn】，若发现污染或疑似污染【rǎn】，请及时与我 们【men】取得【dé】电联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基【jī】(DMEM，GIBCO);马血清，10%;双抗
1%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水面要【yào】低 于冻存【cún】管盖部）摇【yáo】晃解冻，移【yí】入【rù】事先准备好的含【hán】有4mL培养【yǎng】基【jī】的【de】15ml离心管中混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，加入【rù】lmL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有【yǒu】细胞悬液移【yí】入含有5ml培养基的【de】培养瓶中培养过夜。 第二【èr】天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-20次。
力【lì】口【kǒu】 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培
养箱【xiāng】中消化9-20分钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大【dà】部 分变圆并脱【tuō】落，迅速拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后【hòu】加入【rù】3ml此细胞的 培【péi】养基终止消化。
轻轻吹【chuī】打后吸【xī】出，移入15ml离心管中，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】， 弃去上清液【yè】，加入【rù】lmL培养液【yè】后吹匀。
移入【rù】到事先准备好的含【hán】有5ml培养基的T-25培养【yǎng】瓶中或含有14ml培【péi】养 基【jī】的T-75培【péi】养瓶中【zhōng】培养。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞冻存时【shí】，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-20次后加入lml胰酶【méi】，细【xì】 胞【bāo】变圆脱落后，加入2ml*培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化，可使用【yòng】血球计数【shù】板计数。
1000RPM离心5分【fèn】钟去掉【diào】上清【qīng】。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后【hòu】迅【xùn】速混【hún】匀，按每【měi】lml的数量分配到冻【dòng】存管中，注意冻存 管做【zuò】好标识。本公司【sī】按每个冻存管细胞数目大于【yú】1X106个细【xì】胞冻存。
将冻存管置于程序降【jiàng】温【wēn】盒中，放入-80度冰箱【xiāng】，至少2个小时以【yǐ】后转入液氮灌储存【cún】。记录冻存【cún】管位【wèi】置以便下【xià】次【cì】拿取。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污【wū】染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜【qián】在的【de】生物危害性，必须在二级生物安全【quán】台【tái】内操作，并请【qǐng】注意【yì】防护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需要【yào】灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。